家蚕5-羟色胺受体基因的克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(5):987-1001 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.05.17 家蚕5-羟色胺受体基因的克隆及表达分析 李海银，李 艳，陈 曦，陈 鹏，陈 萍 （西南大学生物技术学院，重庆400716 ） 摘要：【目的】5-羟色胺（5-HT）在许多生理过程中扮演重要角色，克隆介导 5-HT 生理效应的家蚕 5-HT 受 体及组织表达分析，为研究家蚕 5-TH 受体基因功能奠定基础。【方法】利用基因组数据及半定量 real-time PCR 技术，鉴定克隆4种家蚕5-HT受体基因; 应用生物信息学方法分析5-HT 受体在物种间同源性并构建系统进化树; 利用半定量real-time PCR方法分析它们在幼虫和成虫不同组织的表达情况。【结果】根据预测基因序列，设计特 异引物，克隆得到4种5-HT 受体基因序列，分别命名为 5-HT1ABm、5-HT1BBm、5-HT2Bm、5-HT7Bm （GenBank登录 号KM236100—KM236103），其开放阅读框分别为1 395、1 341、1 881和 1 497 bp，可编码464、446、626和498 氨基酸。4 种 5-HT 受体属于典型的 G 蛋白偶联受体。选择已报道的昆虫及脊椎动物的 5-HT 受体氨基酸序列进行 比对并系统发生树构建，结果显示家蚕4种5-HT 受体间的氨基酸序列相似度仅为30.4%。5-HT1A、5-HT1B、5-HT2、 5-HT7 4种受体在昆虫中的相似性分别为45.4%、61.4%、48.4%、54.1%。另外，家蚕5-HT受体与其他昆虫甚至脊 椎动物有较高的同源性，跨膜区的保守性比非跨膜区高。不同物种间的同一家族5-HT受体的相似性高于同一物种 内不同家族 5-HT 受体的相似性，家蚕 5-HT 受体的进化关系与烟草天蛾最近。半定量 real-time PCR 结果显示， 5-HT1ABm、5-HT1BBm 在幼虫所有组织中均有表达。5-HT2Bm 仅在幼虫的头、腹部神经索、精巢表达。5-HT7Bm 在 幼虫头部、腹部神经索、中肠、脂肪体、精巢、卵巢表达。5-HT1ABm、5-HT1BBm、5-HT7Bm 在成虫中除雌性头部 以外的组织中均有表达，而 5-HT7Bm 在雄蛾的生殖系统中表达量明显高于其他组织。5-HT2Bm 在成虫中不表达。【结 论】鉴定和克隆的4种家蚕5-HT受体基因，在昆虫和脊椎动物中具有较高的保守性，与烟草天蛾同源关系最近， 它们在幼虫和成虫的组织表达模式具有多样性。 关键词：家蚕；5-HT受体；克隆；基因表达 Gene Cloning and Expression Analysis of 5-HT Receptors in Silkworm (Bombyx mori) LI Hai-yin, LI Yan, CHEN Xi, CHEN Peng, CHEN Ping (College of Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400716) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to clone four kinds of 5-HT receptor genes and investigate their expression in different tissues of Bombyx mori, and to provide basic knowledge for further functional studies of these 5-HT receptor genes. 【Method 】Four 5-HT receptors were