家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2（BmIBP2） 的原核表达与组织特异性分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(23):4916-4923 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.23.019 家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2 （BmIBP2） 的原核表达与组织特异性分析 1,2,3 3 1,2 1,2 1,2 1,2 高 坤 ，邓祥元 ，朱 峰 ，汪生鹏 ，钱荷英 ，郭锡杰 1 2 3 （江苏科技大学蚕业研究所，江苏镇江 212018 ； 中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江 212018 ； 江苏科技大学生物与化学工程学院， 江苏镇江 212018 ） 摘要：【目的】从体外表达家蚕中新发现的1 个免疫球蛋白超家族成员—类胰岛素相关肽结合蛋白2（BmIBP2）， 并制备其多克隆抗体，为进一步深入研究BmIBP2 的生物学功能奠定基础。【方法】以家蚕中肠的总cDNA 为模板， 利用普通PCR 方法，扩增出BmIBP2 基因的成熟肽序列；通过构建重组表达质粒pET-28a-BmIBP2 对BmIBP2 的成熟 肽进行重组表达；制备多克隆抗体，通过免疫共沉淀的方法研究 BmIBP2 蛋白的组织特异性。 【结果】SDS 电泳分析表达产物发现，重组蛋白rBmIBP2 主要以包涵体的形式表达，目的蛋白大小约为30 kD；以兔抗His-tag 抗体为一抗进行Western blot 检测，结果表明rBmIBP2 具有良好的免疫反应性；用镍离子亲和层析的方法可获得 纯化的rBmIBP2，以纯化的rBmIBP2 为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，Western blot 结果显示家蚕的中肠 组织匀浆液中有1 条约28 kD 大小的条带，大小与BmIBP2 成熟肽的蛋白分子量基本一致，而脂肪体、血淋巴、丝 腺、精巢及卵巢的组织匀浆液中没有检测到特异反应条带。【结论】成功地实现了BmIBP2 在大肠杆菌中的表达和 纯化，并获得其多克隆抗体，Western blot 结果证明BmIBP2 被正确表达，并明确了该蛋白只在家蚕中肠表达的 组织特异性。 关键词：家蚕；类胰岛素相关肽结合蛋白2；原核表达；纯化；抗体 Prokaryotic Expression of Bombyx mori Insulin-Related Peptide-Binding Protein 2 (BmIBP2) and Its Tissue-Specificity in Silkworm 1,2,3 3 1,2 1,2 1,2 1,2 GAO Kun , DENG Xiang-yuan , ZHU Feng , WANG Sheng-peng , QIAN He-ying , GUO Xi-j ie 1 2 ( Sericultural Research Institute, Jiangsu University of Science and Technology, Zhenjiang 212018, Jiangsu; Sericultural Research Institute, Chine