山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(7):1523-1527 Scientia Agricultura Sinica 山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达 1 2 刘文强 ，赵宏坤 1 2 （聊城大学农学院，聊城 252059 ； 山东农业大学动物科技学院，泰安 271018 ） 摘要：【目的】为了阐明重组蛋白的活性，置备具有生物学活性的重组白细胞介素 18，应用于畜牧业生产。 -1 【方法】将含有山羊白细胞介素（gIL）-18基因的重组质粒pET-32a（+）在大肠杆菌BL21（DE3）中以1mmol·L IPTG诱导4h或者更长时间进行表达。【结果】经SDS试验检测到了gIL-18与pET载体融合表达的重组蛋白。 以该重组蛋白与佐剂混合后，免疫小鼠制备多克隆血清。经 Western-blotting 试验证实该重组蛋白具有免疫 原性。经过包涵体变性、层析柱纯化和复性，证实该蛋白具有诱导 MDBK 细胞分泌 IFN-γ和刺激 PBMC 增 殖的生物学活性。这表明重组蛋白保留了天然蛋白大部分的生物学活性。另外，该重组蛋白还可以保护小鼠抵御 PRV强毒的攻击。【结论】这为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的实际应用奠定了基础。 关键词：山羊；白细胞介素-18；表达；活性 Expression of Goat IL-18 Mature Protein 1 2 LIU Wen-qiang , ZHAO Hong-kun 1 2 ( College of Agriculture of Liaocheng University, Liaocheng 252059; College of Animal Science and Technology of Shandong Agricultural University, Taian 271018) Abstract: 【Objective 】 The study was conducted to classify the biological activity of the recombinant interleukin-18 and helpful to the clinical. 【Method 】 The gIL-18 gene was cloned into pET32a (+) vector. The recombinant plasmid pET-gIL-18 in E . coli BL21 (DE3) was induced by 1mmol·L-1 IPTG for 4h or more time for expression. 【Result 】 The fusion protein of pET and gIL-18 was expressed. SDSanalysis suggests that the recombinant protein is about 38kD. Western-blotting indicated recombinant gIL-18 showed a reaction to its specific multi-ant