枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(1):67-74 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.01.008 枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理 彭 兵，张树斌，贾 宇，王立安 （河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016 ） 摘要：【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。 【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白；采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化；对具抗真 菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析；以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为材料，对纯化活性蛋 白的抗真菌机理进行研究。【结果】从粗蛋白中分离到一种抗真菌活性蛋白（FV），与RNA结合蛋白Hfq Bacillus subtilis subsp. subtilis gi匹配率为86.484%，相对分子质量为8 508.5 Da，等电点为 8.04。FV 对玉米小斑病菌孢子萌发的半数抑制浓度（IC -1 -1 ）为138.32 µg·mL ，附着胞形成的IC 为22.23 µg·mL 。经FV处 50 50 理后，玉米小斑病菌菌丝顶端、中部出现膨大泡囊，呈“念珠状”；扫描电镜观察发现泡囊状菌丝表面凹凸不平， 并残留有碎片；透射电镜观察发现在部分菌丝细胞原生质出现“空泡”的菌丝里有“子菌丝”。【结论】枯草芽孢 杆菌菌株 A 产生的抗真菌蛋白与 RNA 结合蛋白 Hfq 高度同源，可抑制致病真菌孢子萌发、附着胞形成，并影响菌 丝细胞的形态和结构。 关键词：抗真菌蛋白；RNA结合蛋白Hfq；孢子萌发；附着胞形成；菌丝形态结构 Purification and Antifungal Mechanism of a Kind of Antifungal Protein from Strain A of Bacillus subtilis PENG Bing, ZHANG Shu-bin, JIA Yu, WANG Li-an (Life Science College of Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to separate and purify a kind of antifungal protein from Bacillus subtilis strain A(CGMCC No.1982), and study the antifungal mechanism using Bipolaris maydis as a indicator. 【Method 】 The crude protein was subjected to precipitation with ammonium sulfate and then a DE52 anion exchange chromatography column was employed for further purification o