辣椒疫霉（Phytophthora capsici）果胶甲基酯酶Pcpme3基因真核表达及功能研究.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(6):1988-1993 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.06.014 辣椒疫霉（Phytophthora capsici）果胶甲基酯酶 Pcpme3基因真核表达及功能研究 1 1 1 1 2 贾永健 ，冯宝珍 ，李培谦 ，张修国 ，付红波 2 （山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018 ； 中国生物技术发展中心，北京 100036 ） 摘要：【目的】对辣椒疫霉果胶甲基酯酶 Pcpme3 基因进行真核表达，制备其特异性抗血清，为用Western blot 检测该基因在辣椒疫霉致病过程中的功能奠定基础。【方法】利用TR-PCR分离鉴定 Pcpme3的成熟肽片段，克隆于 pPIC9K载体。将获得的表达载体转化毕赤酵母GS115，甲醇诱导表达，对表达产物进行SDS分析和免疫家兔 + + 制备特异性抗体。【结果】酵母转化子经 MD、MM 平板筛选和 G418 抗生素筛选与 PCR 鉴定，获得 Mut/His 表型高 拷贝重组转化子，经1%甲醇诱导后，SDS检测发酵上清液，检测出43 kD的特异蛋白。重组蛋白免疫家兔制 备特异抗血清，Western blot检测该基因在游动孢子侵染辣椒叶片中的表达，随着病情加重，该基因的表达逐渐 增强，从而证明该基因参与了病菌的侵染致病过程。【结论】利用真核表达获得的蛋白制成特异性抗体可以有效地 检测 Pcpme3在辣椒疫霉侵染寄主过程中的功能特性。 关键词：辣椒疫霉；果胶甲基酯酶；真核表达；抗血清 Eukaryotic Expression and Functional Analysis of Pcpme3 From Phytophthora capsici 1 1 1 1 2 JIA Yong-jian , FENG Bao-zhen , LI Pei-qian , ZHANG Xiu-guo , FU Hong-bo 1 2 ( College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, Shandong; China National Center for Biotechnology Development, Beijing 100036) Abstract: 【Objective 】 The Pcpme3 gene of Phytophthora capsici was expr