水稻基因启动子OsBTF3p的克隆和启动活性分析.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(3):862-868 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.013 水稻基因启动子OsBTF3p的克隆和启动活性分析 柏亚男，吴茂森，何晨阳 （中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193 ） 摘要： 【目的】分子克隆水稻基因OsBTF3 启动子片段，明确其对靶基因表达的启动作用，为抗病转基因水 稻研究提供理论依据和启动子元件材料。【方法】对 OsBTF3 编码区上游 1387 bp 的启动子（OsBTF3p）序列进行 了克隆和序列分析，构建了 OsBTF3p ∷GUS 融合基因植物表达载体 pCAM-OsBTF3p，利用农杆菌介导的水稻遗传转 化，获得了39 株 OsBTF3p ∷GUS 转基因植株，对OsBTF3p进行了启动活性、组织特异性及病原菌诱导性分析。【结 果】分子克隆了 OsBTF3p 片段，其序列与 GenBank 中的已知序列一致。在转基因水稻愈伤组织中能够检测到 GUS 活性，表明该启动子具有启动活性。在转基因水稻叶片维管束组织和根部组织能检测到 GUS 活性。水稻白叶枯病 菌(Xoo)侵染后 OsBTF3p 驱动的 GUS 活性明显地上调表达。【结论】OsBTF3p 具有驱动 GUS 基因表达的启动活性、 组织表达特异性和病原菌诱导性。 关键词：OsBTF3p；GUS活性；组织特异性；病原菌诱导性；水稻 Molecular Cloning and Activity Analysis of a Rice Gene Promoter OsBTF3p BAI Ya-nan, WU Mao-sen, HE Chen-yang (State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】 To make a cloning and functional analysis of OsBTF3p, a rice gene promoter directing GUS expression. The functional analysis of OsBTF3p is helpful to understand the mechanisms of gene expression and to utilize in generation of transgenic plants. 【Method 】 A 1378bp promoter of an inducible rice gene OsBTF3 upon infection by Xanthomoas oryzae pv. oryzae (Xoo) was amplified by PCR and named as OsBTF3p. OsBTF3p fused in frame with the gus reporter gene and the resulting construct (OsBTF3p::GUS) was transformed into the rice calli through Agrobacterium -mediated transformation. Thirty-nine transgenic plants of rice （T0 generation ）