两株拮抗菌的发条件、定殖动态及生防效果研究.pdfVIP

摘要 土传病害是植物病害中较难防治的一类病害。本研究对土传病害一大豆根腐病的生物防治 进行了研究。从大豆根围土壤中分离筛选出13株对大豆根腐病有拮抗作用的细菌。通过平扳对 峙法检测．菌株BRF．1和BRf一2对供试的7株病原菌均有拮抗作用。依据生理生化特征并用 t6sfRNA分子技术鉴定BRf．1和BRF-2菌株的分类地位，通过测定菌株发酵培莠液的oD吸 收值、单位体积发酵液的含菌量以及无菌滤液的抑菌圈半径等指标，研究了影响两株生防细菌 拮抗物质产生的因素、拮抗物质的提取方法及其理化性质。利用抗药性标记研究了两株细菌的 定殖动态，分别用平皿计数法和变性梯度凝胶电泳(DGGE)法研究了两株拮抗菌对±壤微生 物数量和多样性的影响，并利用盆栽试验研究了对大豆根腐病的生防效果。取得的主要结果如 下： 1．利用三层筛选法从大豆根际分离出13株对茄腐镰孢菌(ndn盹Mso伽f)具有拮抗作用的 细菌，抑菌圈半径在2mm一12mm之间。其中两株拮抗作用较好的Bl讧一1、BRF．2菌株对 尖孢镰孢菌芬芳变种(F s口细i土禾谷镰孢菌(f o聊orⅢ‰v钮oleIls)。茄腐镰孢菌(F 茄枯萎菌(F“懿口Drm￡sp．枷q胛m缸f)和黄瓜尖孢镰孢菌(FDv驴orⅫ￡sp．cw^mP，加m1) 也具有拮抗作用。 2．经过生理生亿鉴定和16srRNA分子技术鉴定，BRF一1菌株为类芽孢杆菌(胁nf6∞f船 招咖P附f)，BRF．2为枯草芽孢杆菌(及_州^盯s“6嬲s)。 培养基培养24h条件下，生长量和拮抗活性达到最大值。BRF-2菌株在装液量为20mL，250mL 三角瓶、pH值为7．O的PSs培养基培养72h条件下，生长量和拮抗活性达到最大值。 4．拮抗物质的提取和性质：用硫酸铵沉淀可将Bm’-1菌株产生的拮抗物质析出，拮抗物质含 有低分子量的肽类物质，对高温高压及蛋白酶k稳定，对碱不稳定。B砌：-2菌株产生的拈 抗物质可用固体浸提的方法提取，特征为非蛋白类的水溶性的抗生素，对高温部分敏感， 不耐强酸和强碱。 5．定殖动态：两株拮抗菌均能在土壤中很好定殖，接种后48d，BRF．1仍能维持在3．16×103cFu， 克土壤以上，BRF-2能维持在6．3×104CFu，克土壤以上。菌株BI强．1和BRF-2均对土壤微 生物数量和多态性产生不同程度影响，能提高土壤健康水平。 6．盆栽防效：BRF—l菌株和BRF-2菌株对大豆根腐病具有较好的防治效果。同时能够促进幼 苗生长。 关健词：拮抗细菌，发酵条件，定殖动态，大豆根腐病，生物防治 Abs仃act co“旨olofF协a一硎 diseasesiss州ousinchinawrhr弧ldI丽on Soil．bomeDlam bioIo西cal r00tmtof isa soiI．bomedise砸es．More one锄ong plant n瑚10如tagonistic sOybeaIl，whichtyPical di∞aSewerescre％ed矗Dm soil．T钾oisol砒esi．e． is01种嚣a印inStsoybe卸rot soybeanrhizosphefe BRF-2have bToad sevcn BRF-1柚d S仃0119蛐d specnllmantagonisticab】时againstfhngalpathogens． ident哺edllle characteristicsand16s删A Thet、vois01ateswcre by physiolo百ca】柚dbiochemjcal