利用基因芯片对割引起牛生长发育和脂肪沉积变化分子机理的研究.pdf

摘 要 本试验首先以同龄、同场的60头国内、外肉牛品种为研究对象，利用超声波活体检测技术 采用最小二乘法建立了肉牛宰后肉质性状的预测模型，显示超声波技术不仅可以准确、快速、低 成本的检测肉牛背膘厚、眼肌面积和大理石花纹情况，还提供了通过检测活体性状预测宰后性状 的可能。 为研究肉牛生长发育和脂肪沉积的分子机制，本试验以两门塔尔牛公牛和阉牛各3头作为试 验材料，因为阉割是肉牛生产中常用的技术手段，阉割后肉牛在习性、外观和生长发育过程都发 生了很大的改变，这些发展的速度很慢，暗示这些发展是通过基冈表达差异的改变进行的，因此 采用Affymetix公司的基因芯片技术，研究了二者之间肝脏和脂肪组织的基冈表达谱，经过数据 分析找到了因阉割引起的生长发育减缓，脂肪沉积速度加快的有关的差异表达基因。并通过荧光 定量PCR技术对芯片结果进行验证。 结果如下： (1)本研究在国内首次建立了超声波技术活体检测技术预测牛肉产量的数学模型：屠宰 EMA=30．6032+1．0383X 以在实际生产中灵活运用。通过我们实践中测得的牛数据对模型的验证，表明所得模型计算方便， 精确度高，具有较强的实用性，提供了从幼龄牛或成年牛预测宰后性状的可能。 (2)对西门塔尔牛公牛和阉牛各5头的生长性状和肉质性状进行分析，发现育肥初公牛和 阉牛的生长发育性状(体重、体高、体斜长、胸围和管围)无差异(p0．05)，肥育14个月后公 牛体斜长、出栏重、屠宰重、胴体深显著高于阉牛(p0．05)；肉质性状中公牛胴体重、蹄重、前 腿肉、脂色、眼肌面积显著高于阉牛，但系膜网膜油、大理石花纹、背膘厚、水分和含钙量显著 生长相关的性状阉牛发育较慢，但脂肪沉积速度较公牛快，阉牛肉质性状较公牛好。 异表达分析发现，公牛与阉牛相比代表334个基因的362个探针发生转录变化(大于等于2倍或 小于等于0．5倍)，其有251个已知基因发生转录改变，上调195条、下调56条，它们主要20 个参与免疫系统过程、26个参与刺激应答、22个参与发育过程、19个参与多细胞有机过程、9 个参与生物粘连生物学过程，多位于胞外区(13个)，具有结合功能(77个)。没有分类信息 的基因132个。结合关键字方法共获得直接影响生长发育和脂质代谢的基因173个在肝脏中发生 转录变化。涉及酶调控功能、结合功能、催化功能、抗氧化剂功能、分子转运功能、结构分子功 能、转录因子功能和运输功能。通路分析结果显示阉割后引起生长发育迟缓的机理可能是阉割后 录变化，从而导致肌肉合成速度减慢。并且阉割后引起大量免疫相关基因BOLA．DOAl、 发生转录变化，揭示阉割后可能免疫基因的转录变化也影响了生长发育和脂质代谢。 (4)对阉牛和公牛脂肪基因芯片筛选发现，有1925个已知基因发生转录改变，上调103条、 阉割可能引起脂肪细胞自身分泌LEP基因减少，并且乳糖通路所有基因在转录水平上均发生变 化。引起免疫通路中lL2伶和EPO发生变化，从而引起一系列反应，影响蛋白质水解过程。从而 影响脂肪沉积过程。 (5)肝脏和脂肪差异表达基冈结果各选择了10个代表性基冈进行FQ—PCR验证，结果显示 除脂肪LEPR基冈外所有的基因表达变化趋势与芯片杂交反映的结果一致，基因的表达变化情况 符合生理学特征，也从另外一个角度证明本研究筛选的生长发育和脂肪沉积相关基因准确可靠、 具有潜在的应用价值。LEPR基因检测结果不符合也证明了选择(0．5，2)作为筛选标准具有实 践性，采用倍数法不应任意缩小差异标准。 总之，本研究获得的差异表达基因为今后进一步深入研究牛乃至整个哺乳动物生长发育和脂 肪沉积提供了一个有价值而重要的候选基因库。 关键词 牛 肝脏 脂肪 超声波 芯片 差异表达基冈 Abstract andsame usedtoestablish modesof 60cattleatsame were age factory prediction posslaughter thatultrasound cannot traitsultrasoundmeasurementinlivecattle．Theresultsshowed by