小鼠原核期胚胎璃化冷冻保存.pdf

捅要 为了建立昆明小鼠胚胎冷冻经济、有效、稳定的方案，本研究以该品系小鼠 体内受精胚胎(原核胚)为试验材料，从胚胎回收、冷冻载体、冷冻保护剂等环 节出发，探讨了昆明小鼠体内受精原核期胚胎经历玻璃化冷冻保存后的发育能 力。 论文包括五个试验，具体研究结果如下：(1)研究了体重、激素注射量对昆 明小鼠超排效果的影响。结果显示：①体重209时，供体小鼠的超排效率显著 PMSG／hCG，超排效率 低于体重在20319的昆明小鼠(氏0．05)；②使用5IU PMSG／hCG。 不如10IU (2)研究了开放式拉长细管法(Openpulled 两种载体对小鼠原核期胚胎发育的影响。结果显示：OPS组和Cryotop组解冻后 74．10％、57．35％VS65．87％、 胚胎的2．细胞率、4一细胞率和囊胚率分别为84．28％VS 28．34％VS 但Cryotop冷冻结果更接近对照组，效果较佳。 结果发现我们自制的Cryotip玻璃化冷冻载体与成品载体冷冻解冻昆明小鼠原核 期胚胎，经体外培养，胚胎2一细胞率、4．细胞率、桑椹胚率和囊胚率差异都不显 著(尸O．05)，但从数值上看，在自制Cryotip载体冷冻结果中，除了2一细胞发育 率外，其他几项结果都稍微高于成品组：桑椹胚与囊胚率分别为63．84％、58．48％ 效果差。 采用EPS与EDS两种保护剂所获得的胚胎回收率与存活率96．35％、84．83％ 囊胚发育率中，采用EDS组与对照组无显著差异(56．35％VS76．90％)(尸D．D5)， 但EPS组与对照组(33．84％VS76．90％)以及冷冻组之间(33．84％VS56．35％)差 异显著(尸nD习：④EDS组囊胚平均细胞数与EPS、对照组相比较差异显著 (尸D．05)。结果可见采用EDS作冷冻保护剂对昆明小鼠原核期胚胎冷冻效果好于 EPS方法。 (5)除了渗透性冷冻保护剂对冷冻效果有影响，渗透性保护剂与有很大的 作用，本试验以EG、DMSO为渗透性保护剂，研究了蔗糖与海藻糖对胚胎冷冻 构成l：2、l：4、l：8密度大小)对胚胎发育的影响。结果显示采用蔗糖与海藻糖两 种保护剂所获得的胚胎2一细胞率、4．细胞率、桑椹胚率与囊胚率(70％VS67．5％； 69．04％VS72．44％；57．22％VS 58．75％；54．05％VS53．83％)上均无显著差异 r胗D．05)，而且数值差别非常的小，说明蔗糖与海藻糖都能很好地作为昆明小鼠 原核期胚胎冷冻保护剂，而且效果好；解冻后胚胎在1：2、1：4、1：8密度大小的 KSOM-A．A培养液中培养所获得的胚胎2一细胞率、4一细胞率、桑椹胚率以及囊胚 率无显著差异(PO．05)。 综上所述，本研究成功建立了昆明小鼠原核期胚胎有效、经济、稳定的冷冻 蔗糖或者海藻糖冷冻保护剂，在选择供体小鼠时，昆明小鼠体重最好大于209， IU 并使用10 PMSG／hCG剂量的激素。 关键词：小鼠原核期胚胎，玻璃化冷冻，OPS，Cryotop，蔗糖与海藻糖 Abstract of oninvitro Inthisarticlewetestedtheeffect development cryoprotectant invivo or embryo)，and derived embryopronuclear of fertilization(1．cell embryo by toseekforan animalwas mou