玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化.pdfVIP

224 孙鹤 等/玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology February 25, 2013, 29(2): 224−234 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化 孙鹤，郎志宏，朱莉，黄大昉 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081 孙鹤, 郎志宏, 朱莉, 等. 玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化. 生物工程学报, 2013, 29(2): 224−234. Sun H, Lang ZH, Zhu L, et al. Optimized condition for protoplast isolation from maize, wheat and rice leaves. Chin J Biotech, 2013, 29(2): 224−234. 摘 要: 玉米Zea mays L. 、小麦Triticum aestivum L. 、水稻Oryza sativa L.是三大重要粮食作物，对其原生质 体制备条件的优化具有重要意义。以玉米 ( 综3) 、小麦 ( 中国春) 、水稻 ( 日本晴) 10 日龄幼苗为材料，研究了 叶肉细胞原生质体分离过程中的酶浓度、酶解时间和离心力大小等因素对产量和活力的影响。结果表明：酶浓 度和酶解时间对原生质体产量影响显著，随着酶解液浓度和酶解时间的提高，原生质体产量增加，但细胞碎片 同时增多。水稻经真空处理后，原生质体产量大幅度提高。通过正交实验设计得出如下结果：玉米叶肉细胞原 生质体分离的最佳条件为：纤维素酶 1.5 ％，离析酶0.5 ％，50 r/min 酶解7 h ，100×g 离心2 min 收集，原生 质体产量为 7×106/g FW ；小麦叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为：纤维素酶1.5 ％，离析酶0.5 ％，50 r/min 酶解5 h ，100×g 离心2 min 收集，原生质体产量为6×106 /g FW ；水稻叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为：纤 维素酶2.0 ％，离析酶0.7 ％，50 r/min 酶解7 h ，1 000×g 离心2 min 收集，得到的原生质体产量为 6×106 /g FW 。 通过二乙酸荧光素染色发现原生质体活力均在90 ％以上。用PEG-Ca2+介导法将含有绿色荧光蛋白的质粒转化 入原生质体，转化率可达 50 ％~80 ％。 关键词: 玉米，小麦，水稻，原生质体 Optimized condition for protoplast isolation from maize, wheat and rice leaves He Sun, Zhihong Lang, Li Zhu, and Dafang Huang Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China Abstract: Maize (Zea mays L.), wheat ( Triticum aestivum L.) and rice ( Oryza sativa L.) are three staple crops and Received: September 27, 2012; Accepted: December 3, 2012 Supported by: Nati