应用电化学电化学传感器摘要.pptVIP

生物传感器(Biosensor)是指用固定化的 生物体成分或生物体本身作为敏感元件 的传感器，是一种将生物化学反应能转 换成电信号的分析测试装置。 离子选择电极 电位型电极 氧化还原电极 电化学电极 电流型电极 氧电极 离子选择电极 离子选择电极是一类对特定的阳离子或阴离子呈选择性响应的电极，具有快速、灵敏、可靠、价廉等优点。在生物医学领域常直接用它测定体液中的一些成分（例如H+，K+，Na+，Ca2+等）。 氧化还原电极氧化还原电极是不同于离子选择电极的另一类电位型电极。这里指的主要是零类电极。 2、电流型电极 氧电极 有不少酶特别是各种氧化酶和加氧酶在催化底物反应时要用溶解氧为辅助试剂，反应中所消耗的氧量就用氧电极来测定。此外，在微生物电极、免疫电极等生物传感器中也常用氧电极作为信号转换器，因此氧电极在生物传感器中用得很广。 目前用得最多的氧电极是电解式的Clark氧电极，Clark氧电极是由铂阴极、Ag/AgCl阳极、KCl电解质和透气膜所构成。 三、电化学生物传感器的分类（根据敏感物质分类） 酶传感器 免疫传感器 组织传感器、细胞传感器等 （一）酶传感器酶电极电化学电极顶端紧贴一层酶膜 1、酶的固定化技术 惰性载体——物理吸附法 离子载体—交换法 活化载体—共价结合法 物理包埋法 物理吸附法酶分子通过极性键、氢键、疏水力或π电子相互作用等吸 附于不溶性载体上。常用的载体有：多孔玻璃、活性炭、氧化铝、石英砂、纤维素酯、葡聚糖、琼脂精、聚氯乙烯、聚苯乙烯已用此法固定化的酶如： 脂肪酶、α－D葡萄糖苷酶、过氧化物酶等 交换法 选用具有离子交换剂的载体，在适宜的pH下，使酶分子与离子交换剂通过离子键结合起来，形成固定化酶。 常用的带有离子交换剂的载体如下： DEAE一纤维素、TEAE一纤维素、 AE—纤维素、CM—纤维素、 DEAE一葡萄糖、肌酸激酶 2、酶传感器应用 （1）葡萄糖传感器 大肠杆菌改良型葡萄糖传感器 MWCNTs-HRP葡萄糖传感器 检测血清中葡萄糖浓度 大肠杆菌改良型葡萄糖传感器 利用大肠杆菌中的葡萄糖脱氢酶(mGDH)对氧分子的不敏感性而降低干扰。 此传感器把大肠杆菌细胞固定在附有苯醌的石墨电极上，中间夹有一层透析膜。 检测葡萄糖浓度达0.2-10 mM ，响应时间在2min左右，此葡萄糖传感器用EDTA处理后可再度使用。 MWCNTs-HRP葡萄糖传感器 施加电压为-300mv时，可避免抗坏血酸、尿酸等干扰，对葡萄糖在GOD作用下生成的过氧化氢有高的灵敏度。 MWCNTs和HRP混合物固定在电极上，制成MWCNTs-HRP改进型电极。 检测限达1.0 x 10(-7) mol/L,还可在线检测葡萄糖。 检测血清中葡萄糖浓度 在普通葡萄糖电极上加一层多功能膜，使测量不受血液中其它金属离子以及抗坏血酸、尿酸等干扰物质的影响。 此多功能膜为磷酸胆碱，甲基丙稀酰胺和纤维素的聚合物。 检测血清中葡萄糖浓度达5-650 mg/dl，响应时间小于60s，有很好的重现性和稳定性。 （二）免疫传感器 基本原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂） 酶联免疫吸附测定法 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 酶联免疫吸附测定法临床应用 酶电极在40nL的微池中检测D-Dimer浓度应用于临床试验。检测到D-Dimer浓度范围为0.1 －100 nM ，抚育时间从几小时减少到5分钟。 利用抗原抗体反应前后电位的变化检测B型肝炎抗原。检测浓度范围为4-800 ng/ml，检测限达1.3 ng/ml。此方法比常规检测更加直接，快速，简单。 （三）细胞