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第四章 色谱分析法 1.色谱法的原理 2.气相色谱法的特点及仪器结构 3.高效液相色谱的特点，高效液相色谱仪的基本组成 一、色谱法的特点、分类和作用 1906年，俄国植物学家 茨威特分离植物叶绿体中 色素而得名，玻璃管中装 CaCO3,石油醚溶解植物 叶绿体倒入管内，再用石 油醚做淋洗剂，结果，柱 子中被分成几个不同颜色 的谱带。 试样混合物的分离过程就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 色谱法分离基础 计算 ① （一组分峰面积／94％） （ 总峰面积／94％） ② 以标准曲线来计算含量，以含量为横坐标，峰面积为纵坐标。 2.色谱法分类 液相色谱 (3)其他色谱方法 3.色谱法的特点 二、 气相色谱法（GC法） Gas Chromatography 流动相——气体（由载气带着物料气体） 一般用高压气瓶供给（N2、He ) 固定相 固体 ——固体吸附剂 液体——担体 + 固定液 （一）气相色谱仪器 gas chromatographic instruments 气相色谱仪器 气相色谱仪器 Varian3900GC-Saturn2100T （二）气相色谱结构流程 process of gas chromatograph 结构流程 三、高效液相色谱法（HPLC) 由经典的液相层析法发展来的，始于1906年，比气相色谱分析法早四十多年。但一度停滞，因其流动相靠自身的重力流过色谱柱，效率低，分析周期长，缺乏自动灵敏的检测装置。70年代后，又吸取气相色谱经验迅速发展。 高效液相色谱的特点： ㈠ 应用范围广 只要能制成溶液的样品都能分析，不受试样挥发性的约束，对无法用气相分离的沸点高，热稳定性差，分子量大的聚合物及离子形物质，具有很大的适用性，都可用其来进行分离，分析。 ㈡ 高压 供液压力和进样压力均很高，一般15～30mpa，最高 500mpa。 ㈢ 高速 由于高压，流动相在色谱柱内流速一般为1~10ml／min，个别达100 ml／min以上。 ㈣ 高效 柱效达 5000 塔板／m，而分离效能很高 的GC柱效约 2000 塔板／m。 ㈤ 灵敏度高 采用了高灵敏度检测器，如紫外检测器 的最小检测量10-9g／ml, 荧光检测器的 最小检测量10-11g／ml。 （一）液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） Varian1200L LC/MS （二）流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 高效液相色谱仪的基本组成 1. 输液系统——高压泵、贮液器、过滤器、梯度洗脱装置 2.进样系统——进样器 3.分离系统—色谱柱、恒温器 4.检测系统——检测器 5.数据处理系统——记录仪等 色谱在食品农残分析中应用 　　由于食品组成成份复杂，基质干扰较大，色谱法可通过待测物质与标准物质的保留时间定性，峰高或峰面积定量的方法，可以一次同时快速、准确地检测食品中多种农药残留，使农药定性、定量结果更加准确可靠。 样品分析过程 * * 1.概述 色谱法是一种分离技术，混合物最有效的分离、分析方法。 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础 tR t0 数据处理 从记录仪得到的色谱图 某一组分比例 = (1)气相色谱：流动相为气体（称为载气）。 按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱； 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱 (2)液相色