3. 高效液相色谱法要点.pptVIP

高效液相色谱法（HPLC）： 高压输送流动相 高效固定相 高灵敏度检测器 HPLC与经典液相色谱法比 颗粒极细、柱效高，分离效率高 高压输液泵输送流动相 高灵敏度检测器（紫外，荧光） 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法 （一）正相（键合相）色谱法 1.固定相：极性键合相 如氰基(－CN)、氨基(－NH2) 键合硅胶 2.流动相：烷烃加醇类 3 适用范围：极性至中等极性的分子型化合物 4. 保留行为： 组分极性↑，k↑， tR 大，后洗脱出柱。 流动相的极性↑，洗脱能力↑ ，组分 k↓，tR ↓，先洗脱出柱。 （二）反相键合相色谱法 1.固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）/辛烷基(C8)键合硅胶 2.流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂 常用甲醇－水、乙腈－水等 （1）溶质的分子结构（极性） 极性↓，疏水性↑，k ↑，tR ↑ 同系物碳数越多，极性越弱，k越大 引入极性取代基，降低疏水性，k值变小 （2）固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长↑ ，溶质的k ↑ 硅胶表面键合烷基的浓度↑ ，溶质的k ↑ （3）流动相 极性↑ ，洗脱能力↓，使溶质的k ↑ 溶剂比例：水的比例↑ ，使k ↑ pH：影响弱酸、弱减的离解 流动相的pH降低，弱酸k