诱骗受体3在子宫颈上皮内瘤变子宫颈癌中表达临床意义.docVIP

诱骗受体3在子宫颈上皮内瘤变及子宫颈癌中的表达及临床意义 宫颈癌的发生、发展和常规治疗的预后与机体的免疫状态相关c宫颈上皮内瘤变(αN)及宫颈癌的发病与肿瘤细胞的免疫应答紊乱有关,宫颈局部免疫活性细胞质和量的异常被认为在CIN和宫颈癌的发生中起着重要的作用。宫颈癌患者的细胞免疫抑制使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视,导致宫颈癌的恶化诱骗受体3(decoy leccpbr3,DcR3)能调控免疫细胞的活性与分化,而且具有抗凋亡的作用,推测其可能参与了肿瘤细胞的侵袭、转移。本研究通过观察CIN及宫颈癌患者外周血和宫颈局部组织DcR3的表达,探讨DcR3在系统和宫颈局部抗肿瘤免疫中的作用`为开拓宫颈疾病治疗新途径提供实验和理论依据。 一、资料与方法 l资料来源:选择’2O08年1月至2O1l年1月于上海市浦东新区公利医院门诊及住院治疗的宫颈癌及CIN患者⒆例,其中宫颈癌3O例(宫颈癌组),αN39例(CIN组);所选病例均经病理检查证实,并且手术治疗(宫颈癌患者行根治性手术,αN患者行宫颈锥切术)前均未经化疗或放疗c手术前取外周血3llll,肝素抗凝;术中获取宫颈局部病变组织。所有人选对象的年龄、肿瘤大小、位置、病理分型无明显差异。以”例健康女性志愿者为对照组。取外周血及获取宫颈局部组织前均征得研究对象及本院伦理委员会同意。 2方法:(1)流式细胞仪检测外周血DcR3的表达率;夕卜周血300u加人红细胞裂解液8111l,裂解12min,1500r/min离心5min,弃去上清液。每个样本取细胞2×105个,加人异硫氰酸荧光素(FlTc)标记的DcR3单克隆抗体(美国cB0s0eIlce公司产品)0o~h^ug,室温避光孵育30min。最后加入1%多聚甲醛200ul固定,用流式细胞仪检测DcR3的表达率。(2)流式细胞仪检测宫颈局部组织中DcR3的表达率:新鲜的宫颈局部组织用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗,除去血凝块,剪碎、研磨、过滤,溶于PBS中制备成细胞悬液。然后加人细胞裂解液8ml,裂解12min,1500r/min离`心5min,弃去上清液。每个样本取细胞2×105个,加人FITC①c叩抗体0犭鸭,室温避光孵育30mh。最后加人1%多聚甲醛⒛0d固定,用流式细胞仪检测DcR3的表达率。(3)免疫组化叩法检测宫颈局部组织中DcR3的表达;宫颈局部组织石蜡包埋固定后,切成薄片,石蜡切片免疫染色严格按照叩试剂盒说明书进行;以试剂盒赠送的已知阳性组织切片为阳性对照,以PBS代替一抗作为空白对照:细胞质出现清晰的棕黄色为阳性柝记:病理医师采用双言法阅片评分,根据阳性细胞染色强度及所占比例进行综合评分,其中染色强度:黄褐色计3分,棕黄色2分,浅黄色1分,无染色0分;阳性细胞比例:无阳性细胞计0分,1%~ob%为l分,“%~b^o%为2分,51%~乃%为3分,%%~1oo%为4分。阳性细胞比例得分及染色强度得分相加:0~1分为阴性(-),2~3分为弱阳性(+),4~5分为阳性(++).6~7分为强阳性(+++) 3统计学方法:应用SPSS13o软件进行统计学分析,数据采用Ι±s表示,应用扌检验、检验或秩和检验: 二、结果 I各组妇女外周血中DcR3的表达:DcR3在宫颈癌组及CIN组患者外周血中表达明显增高、且在宫颈癌组中增高更为明显,αN组和宫颈癌组DcR3的表达率分别为(57±14)%、(9.0±12)%,明显高于对照组的(45±42)%.分别比较,差异有统计学意义(P0oI);宫颈癌组明显高+CIN组(P0.o1) 2各组妇女宫颈局部组织中DcR3的表达率:DcR3在宫颈癌组及CIN组患者宫颈局部组织中表达明显增高,且在宫颈癌组中增高更为明显,αN组和宫颈癌组DcR3的表达率分别为(83±12)%、(143±29)%,明显高于对照组的(39±10)%,分别比较,差异有统计学意义(P(0.01); 宫颈癌组明显高于αN组(P0.o1)。 3免疫组化方法检测各组妇女宫颈局部组织中Dl R3的表达结果:DcR3的表达定位于细胞质内,胞质出现清晰的棕黄色染色c宫颈癌组及CIN组患者宫颈局部组织中DcR3表达阳性率明显高于对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P(oo1);且宫颈癌组DcR3表达阳性率明显高于C1N组,两组比较,差异有统计学意义(P0o1)。 三、讨论 宫颈癌是全球仅次于乳腺癌致妇女死亡的第2大恶性肿瘤,CIN是宫颈浸润癌演变发展过程中的癌前病变阶段,近年来宫颈癌发病率有上升趋势,因此,对于ClN和宫颈癌的早期诊断和治疗是目前临床亟待解决的问题。常规的手术治疗、放疗和化疗都各有其局限性。生物免疫治疗因其独特的优势将成为肿瘤的第四种治疗模式。免疫系统的免疫监视作用可以杀伤个别的突变细胞,肿瘤间质浸润的淋巴细胞数量与肿瘤转移、复发呈负