利用pcr-scp检测zen对大鼠睾丸中p53基因第八外显子突变的研究.pdf

睾丸中p53基因第八外显子点突变的研究 摘要 谷镰刀菌，三线镰刀菌等产生的具有雌激素作用的真菌毒素，主要污染小麦、大 麦、燕麦、玉米等农作物及动物饲料。玉米赤霉烯酮能引起母畜子宫肥大和阴道 上皮角质化．公猪接触玉米赤霉烯酮后出现“雌性化”症状，给广大养殖户、猪 场造成很大的影响。因而探讨饲料中玉米赤霉烯酮对生殖细胞基因变异及蛋白表 达对繁殖带来的影响，如何减小饲料中霉菌毒素对动物繁殖和生长性能的影响有 ÷分重要意义。 本研究通过对各组大鼠灌服不同剂量的玉米赤霉烯酮，攻毒24h以后，避行 了大鼠睾丸DNA的提取。提取的DNA通过0．8％琼脂糖凝胶电泳的定性鉴定和核 酸检测仪的定量鉴定，结果表明：所提取的DNA纯度较高，含量在170ug／ml左 言，适合于散PCR的模扳。 针对p53基因第八外显子进行了PCR反应，反应产物通过0．8％琼脂糖凝胶 号泳的定性纯度鉴定，对照DNA分子标准物，结果表明：所得到的PCR产物的分 子量大小为200bp左右，表明产物均一，与预测所得产物198bp十分接近，说明 昕得产物即为大鼠p53基因的第八外显予片段。 本实验喟所得PCR产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了SSCP分析， 表明不同剂量的玉米赤霉烯酮都对大鼠p53基因的第八外显子的构象产生了影 响，而且可能对p53基因的碱基序列产生了作用，引起了该外显子的基因突变。 实验的最后我们对PCR产物回收后进行基因测序，通过对所得到的p53基因第八 外显子序列进行比较，发现其确实发生了基因的突变。突变主要发生在基因的5’ u wt g／kg 端，而在20个碱基以后的序列几乎完全相同。其中溶剂对照组和i00 ZEN试验组闻仅相差一个碱基，为缺失突变。而其他两试验组与对照组阅突变频 塞在3％左右。 关键词：玉米赤霉烯酮PCR—SSCPp53基因基因突变 of Exon8Mutationof Gene StudiesOn p53 SD CausedZENPCR·SSCP by by Rats’Spermary Abstract an toxinwhichhas toxin，is estrogen Zearlenone，i．e．F一2 epiph”e action Gibberlla tricinctum zeae，FI by graminearum，Fudarium produced and as andSOon．It feed wheat，oat，corn mainlyempoison cropper,such and offemale canarouseuterine abortion andSOon．It portliness a