刺五加体细胞胚重复发生和抗氧化酶活性研究.pdfVIP

摘要 senticosus 刺自H(EleutherococcusMaxim)为五加科多年生落叶灌木，主要分布于我 国东北，俄罗斯远东、朝鲜、日本，多生于海拔400～1，600m的针阔混交林下。刺五加 历来为我国医药珍品，根、茎、叶均可入药，其产品在国内外享有盛誉。本研究在组织 培养的基础上首次从不添加任何植物激素的培养基中诱导出刺五加胚性愈伤组织，并通 过生物反应器培养出刺五加幼植物体；从完整刺五加植株上直接诱导得到刺五加胚性愈 伤组织；研究两种方法下通过诱导胚性细胞形成体细胞胚的过程中抗氧化酶活性的变 化，为选择刺五加快速优良繁殖条件的研究提供了基础资料。 本论文得出的主要结果如下： 以悬浮培养韩国刺五加体细胞胚发育而来的再生植株作为实验材料，在进行胚性愈 伤组织的诱导条件选择中得出：添加1．0 GA3的固体培养基比不加任何植物生长 mg·L．1 调节物质固体培养基中的胚性愈伤组织诱导率高；添加1．0 2,4．D的固体和液体 mg·L1 培养基均适于胚性愈伤组织的增殖，胚性愈伤组织转到不加植物激素的培养基后，液体 培养基中形成的体胚数量、胚性愈伤组织诱导率和次生胚发生率比固体培养基要高，而 后期的植株再生率及土壤移栽成活率都是固体培养基高于液体培养基。 以中国刺五加种子为实验材料，通过胁迫处理在不添加任何植物激素的培养里诱导 刺五加体胚的形成。研究结果表明：低温胁迫处理刺五加种子可以打破种子的形态休眠 和生理休眠，促使种子发芽；在不添加任何植物激素的培养基中诱导刺五加体胚形成， 糖的培养基搭配有利于固体培养的刺五加体胚增值；在进行体细胞胚增殖时，体细胞胚 继代三周后表面开始形成很多次生胚，对刺五加次生胚进行细胞学观察，发现刺五加次 生胚与母体只是粘贴在一起；刺五加体胚需在液体培养基中培养一段时间形成幼植物 体，实验表明可以通过生物反应器培养大量的刺五加幼植物体，然后转入固体培养基中 形成完整植株，因此可以通过生物反应器培养进行规模化生产。 以中国刺五加和韩国刺五加的体细胞胚为材料诱导次生胚重复发生，在两种次生胚 发生培养过程中的每周取样，共取四周，分别测定SOD、POD和CAT 3种抗氧化酶活 性的变化情况，以探讨次生胚发生过程中氧自由基代谢水平的变化，对测定结果进行比 较，表明：在两种刺五加次生胚发生过程中，SOD活性变化趋势与POD和CAT活性 的变化趋势证好相反，从而使次生胚发生过程中的活性氧处于动态平衡状态。两种刺五 加次生胚发生过程中，中国刺五加次生胚发生中的3种抗氧化酶活性普遍高于韩国刺五 加的，这说明中国刺五加体胚在生物反应器培养中受到剪切力的作用，从而使3种抗氧 化酶活性升高。 关键词 刺五加体细胞胚发生生物反应器抗氧化酶 Abstract Eleutherococcus senticosus a is shrub，which senticosuS似canthopanaxHarms)iswoody cultivatedinthefarsoutheastern extensively Russia，northeastChina，Korea，and Japan，mostly in forests400m amixed to1600m abovethesea． grow spruce-fir-hardwood