北美乔松胚性组成熟胚形成潜力差异的生化基础研究.pdf

北美乔松胚性组织成熟胚形成潜力差异的生化基础研究** 摘 要 本文通过对北美乔松(Pinus strobus)具有成胚潜力差异的两细胞系(细胞系 01 具有成胚潜力，细胞系 02 不具有成胚潜力) 增殖阶段胚性愈伤组织（ET ）细胞形 态及结构差异比较，对比分析增殖阶段 ET 生长、蔗糖代谢及蛋白表达情况，探讨 成熟胚诱导能力差异的形态学、细胞学和分子生物学基础，结果表明： 1、两细胞系ET 在增殖培养阶段形态差异不明显，在ET 结构上有差异：01 细 胞系中存在一种02 细胞系缺乏的结构类型ESM4 。 2 、02 细胞系相对生长率RGR 在整个增殖阶段均高于01 细胞系，RGR 最大值 出现在4-5 天；但01 细胞系RGR 最大值在第3 天，比02 细胞系略有提前，且在 15d 时很低，20d 时接近于0 。 3、两细胞系增殖阶段ET 己糖、己糖/蔗糖比值、转化酶活性和RGR 之间呈正 相关。 4 、采用Bradford 法测定可溶性蛋白总量：01 细胞系ET 可溶性蛋白总量高于 02 细胞系。 5、SDS图谱显示：两细胞系ET 中均存在分子量大小约为88.8KD，64.2 KD ，53.8KD，36.5KD，33.9KD，18.6KD 六种蛋白。其中，18.6KD 蛋白的表达量 01 细胞系强于02 细胞系，36.5KD 蛋白表达量01 细胞系弱于02 细胞系；02 细胞系 中存在71.6KD 和24.0KD 两种特异蛋白。 本项研究首次较系统地报道了北美乔松由增殖到成熟胚诱导阶段的细胞显微结 构，确定了显微结构观测可以作为胚性愈伤组织诱导成熟胚潜力的初步诊断方法。 通过北美乔松胚性愈伤组织RGR 曲线，首次证明了北美乔松胚性愈伤组织增殖 培养阶段必须每隔2-3 周继代一次的必要性。北美乔松增殖阶段蔗糖代谢研究结果 为进一步研究蔗糖在针叶树种体细胞成熟胚诱导过程中的生理功能奠定了基础。 关键词：北美乔松 胚性组织 蔗糖代谢 增殖培养 成熟胚诱导 ** 本项研究受国家自然基金项目资助。 I STUDIES ON THE BIOCHEMICAL BASIS OF MATURE EMBRYOS FORMATION POTENTIAL DIFFERENCE OF PINUS STROBUS EMBRYONIC TISSUE ABSTRACT During the experiment using two cell lines of Pinus strobus (No.01 and No.02) to induce mature somatic embryos, it was found that only the No. 01 cell line had the capacity to form mature embryos. So, we attempted to predict earlier ET’s potential ability to form the mature somatic embryos through comparing differences in ET’s morphology and structure during proliferation culture. By analyzing ET growth, sucrose metabolism and protein expression during the proliferation stage, we aimed at probing into the morphology, cellular and molecular basis in the potential of inducing mature embryos. The results were as the followings: (1)The two c