双耐盐基因载体构建和小黑杨花粉植株组培系统的优化.pdf

摘 要 重组DNA技术是基因工程中的一项十分重要的技术，本研究即利用这一技术，陶 建出了两个重组载体。 用HindIII和EcoR I双酶切pROKII质粒，获得betA基因片段作为插入片段，辟{ HindⅡI和EcoR I双酶切A质粒作为载体片段，将插入片段与载体片段相连，即构建成 含有betA和gUs的双基因载体。 用HindIII单酶切pOAH质粒作为载体片段，将betA基因片段作为插入片段与载体 片段相连，即构建出双耐盐基因载体。 采用单倍体植株作为遗传转化的材料会避免转基因过程中的嵌合体问题和子代分 离问题。本研究以小黑杨花粉为外植体建立了适合转基因的组培再生系统。设置KT和 2，4-D的不同浓度梯度组合实验，确定小黑杨花粉愈伤组织最适诱导培养基为 MS+2--．4mg／L2,4·D+2mg／LKT：设置BA和NAA的不同浓度梯度，确定芽的最佳诱导 0．1·0．5 0．02-0．05 培养基为MH+BA mg／L+NAA mg／L；组培苗生根的最佳培养基为 NAAa 1／2MS+0．2mg／L ， 关键词：基因重组， 耐盐基因，矗；奴 花粉植株。 Abstract RecombinantDNA is in this technologyvery r，we important engineering．In genetic pape two haveconstructedrecombinantvectorsit． by Cutoffbeta from with and If HindIIIEcoRas fragmentplasmidpROK I insert．and cut intolinear asvector the insertand pA fragment．Link vector plasmid fragment together withT4 the veCtorwith beta new and was ligase，and gene gus constructed． Cut with into linear HindlII asvector andinsert pGAH plasmid fragment beta fragment intoit．Therecombinantwith vectordualt