口蹄疫病毒vp基因c末端及猪αβ干扰素在大肠杆菌中的表达研究.pdfVIP

华中农业大学硕士研究生论义 中文摘要 口蹄疫(foot．and—momh disease，FMD)是危害世界各国畜牧业最严重的疾病之 disease ～，其瘸原是口蹄疫病毒(foot．and．mouthvirus，FMDV)。预防和控制口蹄疫 关键是疫苗和诊断方法。目前用于口蹄疫的诊断技术有多种，但ELIsA是一种最经 济、有效的方法之一。而传统ELISA需要全病毒作为抗原或制备抗体，生产全病毒 需要昂贵的培养基，且存在散毒的危险。～种可供替代的方法就是将型特异性序列 进行体外表达，用表达产物作为检测用抗原。此夕}，目前研究发现“B干扰素对口蹄 疫有很好的抗病毒效果。本研究拟从以下两个方面进行： 1．口蹄疫病毒VPl基因C末端串连表达及其抗体ELIsA方法的初步建立 al I、SI 核营酸和氨基酸同源性分别为95％、93％和96％、935％；利用同尾酶Xho 将VPI基因C末端串联起来；再将单拷贝和双拷贝c末端基因插入到原核表达载体 blotting检测 证实表达产物具有活性。以表达产物包被ELISA板，初步建立了特异、敏感的ELISA 诊断方法。同时用表达产物免疫BABL／c／』、鼠，能产生一定的抗。型口蹄疫病毒的 抗体。该研究将在研制新型疫苗和建立诊断方法等方面具有潜在的理论价值和应用 前景。 2，梅山猪a邝干扰素的克隆、定点诱变及原核表达 利用PCR技术从中国梅山猪白细胞总DNA中扩增出a／!B干扰素基因 全基因的核苷酸序列。序列分析表明：9干扰素基因全长561bp，编码186个氪基 点变异，由G变为A，T变为c；但仅导致43位氮基酸由G变为E；猪干扰素 的序列同源性为96％。通过巨引物法，分别对MS—IFN旺基因(第86位氨基酸)和 MS．IFNB基因(第17位氨基酸)进行定点诱变。在此基础上，通过PCR方法将编码 导后，得到高效表达，其表达的蛋白质大小约47kd。表达产物主要为不溶性的包涵 体，包涵体经提取纯化后，能够抑制FMDV增殖。该研究为今后进～步探讨猪干 扰素在抗病毒活性以及作为治疗病毒性急性感染药物的研究奠定基础。 关键词：口蹄疫，抗原表位，原核表达，ELISA，猪干扰素，克隆，序列分析，定点诱变 口蹄疫崩毒VPI基因C末端及猪a／B干扰素在大肠杆菌中的表达研究 ABSTRACT Foot—and’mouthdisease thecausativeof infectious virus(FMDV)is agenthighly and the most animalviraldiseasein theworld．nle economically ofcontrol important key FMD and isto sensitive testsandeffective prevetion develop diagnostic vaccine．Now several thereare ELISAisoneofthe and