口蹄疫病毒vp基因的序列分析及巢式pcr检测研究.pdf

摘 要 将疑似口蹄疫病料送检到中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验 室进行口蹄疫病毒的鉴定，鉴定该病料为0型口蹄疫病毒感染病料。 根据Genbank中注册的0型口蹄疫病毒株VPl基因序列，设计出了一对引物，应 用RT—PCR方法对疑似口蹄疫病料进行VPl基因的检测，并对VPl基因进行测序。结 果表明，此口蹄疫病毒株的VPl基因的全长639bp，编码213个氨基酸，国内外发表 氨基酸序列(1D蛋白)同源率在85．0～92．5％之间。该病料株与台湾和南通流行的0 型口蹄疫病毒株亲缘性最近。对VPl基因的序列测定和分析，丰富了我国FMDV毒株 VPl基因资料库。 本研究在应用RT—PCR对VPl基因的扩增和测序的基础上。选择VPl基因内相对保守 VPl基因的巢式PCR方法。通过对RT—PCR产物的 的区域设计一对引物，建立检测刚DV 二次扩增，能特异性的检测出500bp左右的目的片段。本试验所建立的巢式PCR方法 特异性好，不与猪水泡病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒出现交叉反应。 PCR方法的敏感性比较研究，部标RT—PCR方法能检测出 通过部标RT—PCR方法和nested RT—PcR能检测出样品 l的被检材料；nested 样品中病毒核酸量大于或等于0．23ng／u PCR 中病毒核酸量大于或等于0．23x10。2ng／Ⅱl的被检材料。本试验所建立的nested PCR方法的基础上，本试验提出Tnested 较敏感。在部标RT—PCR、常规RT—PCR矛ilnested PCR方法检测口蹄疫病毒的操作规程。 关键词：口蹄疫病毒，VPl基因，RT—PCR，巢式PCR The ofthefoot—and-mouthdiseasevirus’sVPl analysis gene andresearchofdetectionthe nestedPCR sequence geneby Ⅵs．D．CandidateWangGang Supervisor：WangHongning of^ni∞1Scienceand (College Technology，SichuanAgriculturalUniversity，Ya’an625014。P．R．China) ABSTRACT Foot—and-mouthdisease isolatedfrom tissue virus(FMDV)wasepithelial isolatedviruswas and ftuidfrom andcattle．The epithelial poreine in LANZHOU research characterizednationalreference veterinary facility institute．The ionvirusiS foot—and-mouth(Fh∞V)．whichiS 0． separat