口蹄疫病毒p1a-3c基因在百脉根中的表达及其免疫豚鼠试验.pdf

摘 要 aIldmouth 口蹄疫(foot andmoulhdisease dise鹤e，FMD)是由口蹄疫病毒(f00t vinls．FMDv) 引起的一种急性热性高度接触性传染病，对猪牛羊等家畜和许多野生动物危害严重。灭活疫苗对 口蹄疫的防控起了巨大作用，但其弊端也不容忽视。近些年来．新型口蹄疫疫苗～直是人们研究 的方向之一。转基因植物疫苗由于其成本低廉，安全有效，使用方便等优点成为科学家研究的热 点。 Asial 本研究利用农杆菌侵染法将FMDV rⅥ旧s／58株P12A．3c基因导入牧草百脉根。通过 构建转基因植物表达载体，农杆菌侵染百脉根外植体及组织培养，抗性植株的检测筛选，转基因 百脉根植株茎叶浸出物免疫豚鼠的研究．探索目的基因在牧草百脉根的转化、表达及免疫活性 主要进行如下‘T作： 分析表明Fl{DV各个结构蛋白及非结构蛋白切割位点比较保守，各结构蛋白之间联接氨基酸分别 序列。3c全长639nt，编码213个氨基酸。 2值物双元表达载体的构建：通过设计的引物扩增带有特定酶切位点的目的基因，通过酶切、 重组质粒进行PcR鉴定和序列测定，证明中间表达载体构建成功。通过三亲杂交法将重组质粒 明构建成功，与农杆菌中的help-Ti质粒共同组成植物双元表达载体系统，为下一步的转化奠定 基础。 3．目的基因转化百脉根与蛋白表达检测：以百脉根子叶、子叶柄为转化受体，通过根癌农杆 菌GV3101侵染外植体子叶或子叶柄．经过愈伤、出芽和生根等过程在含有50m肌卡那霉素的 培养基筛选后，获得抗性植株。对抗性植株进行PcR、RT_PcR和EⅡsA检测筛选阳性植株，为 下一步动物免疫试验提供候选植物材料。 4．转基因百脉根免疫豚鼠：将上述检测阳性的植株蛋白提取液，非转基因植株蛋白提取液， 同时设转基因空载体对照，Asial灭活苗阳性对照和弗氏佐剂对照分别免疫豚鼠。首次免疫后第 价最高1：64。 关键词：口蹄疫病毒，转基因植物，疫苗，豚鼠，百脉根 III 英文缩略词 英文缩写 英文名称 中文名称 6-BA 6一Benzjl砌inopu“ne 6一苄基氨基嘌呤 AKP Alkaline phospha协se 碱性磷酸酶 AmD Ampicillin 氨苄青霉素 BCIP 5．溴．4．氯．3．吲哚基磷酸酯 5-Bromo-4-chlom·3-ind01yphosphace BHK hamstercellline Baby kidney 仓鼠肾细胞系 DD Basepair 碱基对 BSA BOvineserumalbumin 牛血清白蛋白 CaMV CauIinowermosaicvims 花椰菜花叶病毒 Carb Carberjcillin 羧苄青霉素 Cef Ce丹adium 头孢霉素 CT-B ChOleratoxillB 霍乱肠毒素B亚单位 DEPC Djethylpyrocarbon8te 焦碳酸二乙酯 dNTP