口蹄疫病毒的血学检测与电镜观察.pdfVIP

FMD血清学与病原学诊断 G-25层析纯 摘要：将猪抗口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清经饱和硫酸铵提取IgG、Sephadex 化，并标记上异硫氰酸荧光黄(FITC)，制备荧光抗体，检测BHK一21细胞中的FMDV抗原，结 果表明：该方法可以检出BHK-21细胞中的病毒抗原，荧光抗体的工作浓度确定为1：40， 且这种荧光能被FMDV阳性血清特异性地抑制。用制各的荧光抗体分别检测感染FMDVCS株 和LB株的BHK一21细胞抹片和飞片，结果均为阳性，空白对照均为阴性。用纯化的IgG致敏 绵羊红细胞，采用反向间接血凝试验(RIHA)检测FMDV标准阳性抗原，结果表明致敏红细 胞活的力达1：960，具有特异性，探索了致敏红细胞的最佳实验条件，采用致敏红细胞对 染乳鼠胴体毒为78％(14／18)。 通过接种BHK一21细胞传代增殖cs株和LB株FMDV，采用蔗糖反透析处理和 SephadexG一200层析的方法浓缩和纯化的病毒液，将病毒抗原致敏绵羊红细胞以正向间接血 凝试验(IliA)进行检测，所制各的致敏红细胞能与FMD阳性血清发生特异性凝集，且能被 FMD标准阳性抗原特异性抑制，采用所制诊断液对贵州某养牛场17份血清待检样本进行了 检测，阳性率为100％(17／17)，对贵州某养猪场的20份血清样本进行检测，阳性率为100％ (20／20)：将上述病毒液采用蔗糖密度梯度离心进一步纯化，取30％～50％蔗糖区段的病毒 液经透射电镜观察，FMDV完整病毒粒子呈均质、中心黑染、边缘整齐、无囊膜、界面清晰， 直径为20～25nm的圆形颗粒。 关键词：FMD：血清学；荧光抗体；RIHA；IHA：电镜 T electron observation he detectionand microcopic serological offootandmOllthdiseasevirus Abstract：Thewas from anti-FMDVserumammonium IgG purified porcine by and theFITCwaslabeledonthe sothatthe SephadexG-25，and IgG persulfate fluorescentwas Thisfluorescentwasusedtodetectthe antibodyprepared antibody this could oftheFMDVinBI-IK·21 results that method antigen cells，the suggested of inBHK一21cellsThe concentrationof detecttheviral FMDV optimal antigen fluorescencecouldbe fluorescentwasdeterminedas1：40．The antibody specifically inhibitedanti—FMDV serumThefluorescentwas to by positive antibodyapplied