多基因转化74杨及其基因表达的初步研究.pdf

摘要 本文是在田颖川和郑钧宝等研究的转双抗虫基因741杨基础上，成功的转 菌株为对照，研究多基因的转化以及初步探讨了多基因之间的基因表达。通过 异对转多基因植株进行鉴定，表明多基因共存于转基因植株中。 1．对转多基因741杨各株系试管苗的生根率、根长、根量、高生长量及 叶片及茎形态变异进行研究，得出大多数转多基因741杨表现出Ri质粒转化 植物的典型特征，转化植株的叶片均在Mso培养基上具有自发根的特性，形态 表现为叶片皱缩、茎生长量减少，试管苗生根率高，侧根极为发达等特点。98％ 左右转基因株系的生根率比对照植株都有明显提高：转多基因株系的根数量比 对照都有增加，根发达，形成簇生根，多得几乎无法计数；根长度大多数株系 明显高于对照，有少数的株系与对照植株相似，有部分株系的根长明显短于对 照；多基因转化74l毛白杨后，引起转化植株叶片增厚，叶面积明显缩小，叶 柄变短，叶面皱缩；茎节间缩短，茁高生长减少，分枝数量增加，个别株系出 现茎弯曲生长，严重影响了苗木的正常生长，但是有少量株系的植株出现了正 常生长的情况，甚至对生长有一定促进作用。 2．通过HPLC法对转多基因741杨不同株系的植株叶片的内源激素进行 了测定。几乎所有转多基因74l杨株系中，植株叶片中内源IAA含量均高于转 双抗虫基因741杨，植株生长表现越矮小的叶片中IAA含量越高，大部分株系 比741杨单转Ri质粒15834菌株对照含量低。 3．采用ELIsA技术，对转多基因741杨不同株系转基因苗和毛状根中历 毒蛋白进行测定，结果表明研毒蛋白在叶片和毛状根中均有表达，叶片毒蛋 白表达量明显高于毛状根的。转多基因苗中不论是其叶片还是毛状根，其毒蛋 白含量大部分株系均比转双抗虫基因741杨的毒蛋白含量低，比单转Ri质粒 15834菌株的含量高。表明转入发根农杆菌后，其原来根癌农杆菌毒蛋白表达 含量降低了。发根农杆菌的转入对根癌农杆菌中的毒蛋白含量有一定的影响， 其增加和降低将会对组培苗体内的各个指标有一定的影响，尤其会影响植物的 生长发育。而植物激素含量恰恰是这一影响的一个具体表现，反过来又会影响 植物的生长发育，进而再影响到的毒蛋白残留与降解的变化。 关键词：Ri质粒；741杨；多基因转化；形态变异；植物内源激素；Br毒蛋白 74landGenic on PopIar Expression PreliminaryStudyPolygenes’Iansf0I。matiOn Au世Ior：zhangshuj嗽 and br∞ding Major：Fore8t仃eegenetics Minsbe鸥 Supervis甜：P∞￡№Ing A蜘lr8ct 741which JlHlbaoand Intllis Hyb僦PoplarZheng smdy，on龇base“Trmlsgenic inffed■．硪拓Dg露趋露s嗽a王nl5834．Compar。畦谢也 联an确ngchu嫩wD呔on，∞c∞ss鳃l 74landme of也e一．m娩o_艄珂甜on pIantlet contml№genicHybridPoplar trallsgenic 娅d 74ich