小鼠胚胎干细胞离培养的研究.pdf

硕士研究生论文 摘 要 目的： 筛选一种简单有效的小鼠Es细胞培养方法；获得一定代次的小鼠ES细胞；通 过培养新生鼠脑神经细胞，探讨适合神经细胞生长的培养条件，为小鼠ES细胞神经 向定向诱导分化及其在脑病模型上的应用奠定基础。 方法： 本试验为2个部分：两种基础培养体系的建立和小鼠ES细胞的分离培养。其中 基础培养体系分为：小鼠胎儿成纤维细胞的培养、冷冻与饲养层的制备；新生鼠脑神 经细胞的分离培养。 1，分别选择妊娠12．5、14．5、16．5d的雌性小鼠采集胎儿做成纤维细胞培养，消化 培养时采用3种方法：组织块培养、单细胞培养和组织块单细胞混合培养，比 较培养结果。 2．比较两种饲养层处理方法：先用终止细胞分裂后传代法和先传代后终止细胞分 裂法，比较两种方法制各饲养层的效果。 3．新生鼠脑组织剪碎、简单消化后作组织块单细胞混合培养，观察培养结果。 4．分别于第3．5和4d(检出阴道栓记为0．5d)采集胚胎，比较囊胚率及其对Es 细胞分离培养的影响。 5，分别采用4种培养方式：饲养层+不含LIF的培养液、饲养层+含LIF的培养