抗鸡γ-干扰素克隆抗体的制备及定量抗原elisa检测方法的建立.pdf

摘 要 ．r干扰素(IFNl)是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因 子。研究表明，内源性IFN-Y水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状 态，因此对样本中的IFNl进行定量分析，在免疫机制研究、免疫功能分析、疫苗 免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等方面都具有极 其重要的理论价值和应用价值。本实验旨在制备鸡丫-干扰素(chIFN-丫)单克隆抗体 并建立对鸡r干扰素的定量ELISA检测方法。 BALB／c鼠3次后，按标准程序融合后，以昆虫细胞表达的rChIFN-Y作为检测抗原， 通过问接ELISA和有限稀释法筛选了阳性杂交瘤细胞株，利用阳性的杂交瘤细胞制 抗之间的特异性。对单抗IgG进行了HRP，FITC及生物素标记，测定了三种标记单抗 淋巴细胞产生了IFN_Y，并利用FITc标记的单抗对其进行了初染。 通过以上试验获得了一株能够稳定分泌抗鸡．|r干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞 X 株，该株单抗命名为G1株，其腹水效价为1．-1 试验表明抗原抗体之间有很好的特异性：对单抗IgG进行HRP，FITC及生物素标记效 立的定量ELISA，其回归方程为y=O．