抗wssv囊膜白单抗的中和效果研究.pdfVIP

抗WSSV囊膜蛋白单抗的中和效果研究 摘 要 proclarkii)检测了单抗在不同病毒浓度下以及单抗两两混合的中和效果，结果表 明MAblD6(VP28)随病毒浓度的降低，体内中和效果越明显；同时提取了VP28、 VP26、VPl 9三种蛋白并通过双向电泳对囊膜蛋白VP28进行初步分析。具体研 究结果如下： (1)WSSV的提纯及抗WSSV囊膜蛋白单克隆抗体的生产：使用差速离心 和蔗糖密度梯度离心法提纯WSSV。复苏了本实验室制备的1D6、2G3、3G7、 2E9等4株单克隆抗体杂交瘤细胞，通过生产腹水得到了足量的抗体并对其进 行提纯。经间接免疫荧光检测，四株抗体与感染WSSV的虾鳃均呈特异性反应。 蛋白VP26反应，2E9能与WSSV蛋白VPl9反应。 (2)不同病毒浓度下WSSV单抗的体内中和实验：通过酶联免疫吸附法测 的OD值。结果显示，在1xlO。3病毒稀释度下两种单抗均足量。利用克氏原螯虾 动物模型，将不同稀释度病毒与单抗1：1混合孵育2h后，肌肉注射克氏原螯虾 (50I_tL／只)，观察记录螯虾的死亡情况。结果显示当病毒浓度为1×10一、l×10珥、 MAblD6(VP28)螯虾组最终死亡率分别为100％、 1×10一、1×10‘6稀释度时， 而MAb2E9(VPl9)并无明显的中和效果。在螯虾中和实验中，除阴性对照组、 光检测均呈WSSV感染阳性。 chinensis) (3)WSSV混合单抗的中和实验：提取中国对虾(Fenneropenaeus 血细胞膜并对WSSV进行地高辛标记，将单抗两两混合后与病毒作用，吸附对 虾血细胞膜，使用抗地高辛抗体检测结合到血细胞膜上的病毒。结果显示混合前 后OD值无明显变化，因此不能证明四株单抗之间具有协同作用。利用克氏原螯 粗提液l：1混合孵育2h后，肌肉注射克氏原螯虾(509L／只)，观察记录螫虾 的死亡情况。结果显示单抗混合之后螯虾的累积死亡率与MAblD6(VP28)螯 虾组的累积死亡率无显著差异，因此不能证明MAblD6(VP28)与其他三株抗 体之间具有协同作用。 胶分离病毒蛋白，并洗脱提纯，获得了VP28，VP26及VPl9三种蛋白。经 将VP28进行双向电泳，图谱显示，BlueSilver染色法染色之后的胶体，只有一 个蛋白点可见，其等电点在5．8左右，因此VP28蛋白可能由单一的蛋白构成。 关键词：对虾白斑症病毒；囊膜蛋白；单克隆抗体；中和 Neutralizationof monoclonalantibodies assay to specific WSSV envelopeproteins Abstract Inthis were and thesis，ascites which producedpurified utilizinghybridomas secretemonoclonal the or antibodies(MAbs)againstVP28，VP26 envelopeproteins VP19ofWhite neutralizationeffectsmixed