抗猪轮状病毒单隆抗体的制备及双抗体夹心elisa检测方法的初步建立.pdfVIP

目 录 目 录 中文摘要………………………………………………………………………………………………．I 英文摘要……………………………………………………………………………………………．．III l前言…………………………………………………………………………………………………1 1．1PRV病原学特征………………………………………………………………………………．．1 1．1．1PRv的形态结构和理化性质………………………………………………………………1 1．1．2轮状病毒的培养特性………………………………………………………………………2 1．1．3轮状病毒的抗原分型………………………………………………………………………3 1．1．4轮状病毒的基因组结构、蛋白及功能……………………………………………………3 1．2轮状病毒的诊断方法…………………………………………………………………………．．4 1．2．1猪轮状病毒临床诊断………………………………………………………………………4 1．2．2猪轮状病毒实验室诊断……………………………………………………………………5 1．3单克隆抗体的研究进展………………………………………………………………………．．6 1．3．1单克隆抗体的概述…………………………………………………………………………6 1．3．2抗PRV单克隆抗体的研究进展……………………………………………………………6 1．4研究的目的意义………………………………………………………………………………．6 2材料与方法…………………………………………………………………………………………8 2．1试验材料………………………………………………………………………………………．8 2．1．1细胞与病毒…………………………………………………………………………………8 2．1．2实验动物……………………………………………………………………………………8 2．1．3临床粪便样品………………………………………………………………………………8 2．1．4培养基和主要试剂…………………………………………………………………………8 2．1．5主要试剂的配制……………………………………………………………………………8 2．1．6主要实验仪器设备………………………………………………………………………．1l 2．2试验方法………………………………………………………………………………………11 2．2．1免疫原的制备……………………………………………………………………………．1l 2．2．2免疫动物…………………………………………………………………………………．12 2．2．3杂交瘤筛选方法的建立…………………………………………………………………．12 2．2．4杂交瘤细胞株的建立与筛选……………………………………………………………．13 2．2．5单克隆抗体效价的测定…………………………………………………………………．14 2．2．6单克隆抗体生物学特性鉴定……………………………………………………………．15 2．2．7双抗体夹心ELIsA方法的初步建立……………………………………………………16 2．2．8双抗体夹心ELIsA方法优化……………………………………………………………17 2．2．9双抗体夹心ELIsA方法的灵敏性试验…………………………………………………．18 2．2．1 0双抗体夹心ELIsA方法的特异性试验………………………………………………．．18 东北农业大学农学硕士学位论文 8 2．2．11双抗体夹心ELISA方法的重复性试验………………………………………………．．1 9 2．2．12双抗体夹心ELISA方法检测临床样品………………………………………………一1 3结果…………………………………………………………………………………