日本血吸虫疫苗研究——提高疫苗免疫效果的探索和血吸虫雌雄虫转录谱分析研究.pdfVIP

内容攮要 血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫瘸，我国现行的防治策略不能有效 地控制该病的流行，迫切需要研究并提出新的防治技术。为此，血吸虫病疫苗研究 备受关注。围绕这一主题，本博士后工作主要集中在从技术策略上探索提高m吸虫 疫茁免疫保护力豹可能途径，如构建粘袋免疫蜀疫簿：构建血吸虫抗原表位稻乙型 肝炎核心抗原融合的家蚕表达转移载体；开展多价疫苗研究等。同时，开展日本血 吸虫基因表达谱的研究，为寻找毅的具有兔疫保护作建的疫茁候选分子提供墓硇。 具体研究工作如下。 l_Sj．28GST抗原表位与CTB融合基因构建、表达及其免疫效果研究 toxinB 霍乱毒素B照基(cholera 达，检测该种旗膜疫萤的免疫保护效果。为了在大肠杼菠中裘达霍乱毒素B嚣孽位， 检测重组蛋白能够被抗C羊抗体所识别，其存较好豹抗原性。ELISA实验显示耋组蛋 白能与神经节苷脂结合，表明其具有CTB的生物学活性。 感染日本血吸虫尾鳓404-1条，45d后解音I观察减虫率和减卵率。结槊， 为46。3％及2l。3％。矮表达产物经日服免疫小藏后，所产生的对鑫本盘毅虫豹免疫保 护力明鼹高于用单独的重级Sj．28GST免疫的小鼠所产生的免疫力，所农达的融合蛋 白中CTB可能起至I了免疫佐剂的作用，增强了SJ．28GST的免疫琢性。 2．日本撒吸虫抱雌沟蛋白编码基因的克隆与诱导表逸条件的研究 canal 日本J：缸吸虫抱雌沟蛋白编码基因(Gynecophoral 异表这，同血吸虫雌雄宝合抱、雅虫发育、成熟、产卵稿关的基因。本文于该序列 开放阅读框两端设汁引物并分别引入Xho]I和彪舢Ⅲ两个酶切位点，以原有的 长1932 mmol／L一2．0 溶解的方法，结合分子鼹层撰和亲和层柝，对重组融合蛋白包涵体进行了缝化。 3．日本血吸虫多价疫苗的研制和免疫效果 评估多价疫苗是否熟有协同免疫保护作用，戏察三种重组的日本血吸虫抗原蛋 S 白：28KDa谷胱甘肽s转移酶rSj．28GST(glutathione membrane 日本照吸虫23KDa貘蛋翔大亲本端(23kDa proteinlarge 照组。最螽一次免疫后，每爵攻击40±1条目本血吸虫尾辫，42天割蓉。结巢，各免 疫组回收虫体数均有下降，从6％到39％不等，肝脏虫卵计数显示，各免疫组虫卵 数也均有所下降，减卵率从24．O铲47％不等，其中以DNA混会疫苗缀减虫裙躐卵幅 价或单价疫苗一样，都能诱导产生对血吸虫攻击感染的部分免疫保护力，但朱见明 显提高免疫保护力。用重组的sj，28GST一次、二次、三次免疫动物，都可诱警显著 的保护效果，三次免疫获得的保护效果略高于一次、二次免疫组，但差异不最著。 4。家蚕发达日本癜吸虫缣护性抗原表位积Z；型|盱炎核心抗原融合蛋巍的研究。 乙肝核心抗原(HBcAg)具有很强的免疫原性，可用来增强自身免疫原性不强的 糙末端连接的方法，将它船分别与|lBcAg的免疫优势区c／el80—81位融合，孝句建家 蚕表运转移载体。测序分析，这些抗原表佼核苷酸序列同HBcAg基因融合，得到了 作为免疫载体蛋囱研制抗盘吸虫瘸疫苗提供了基磁。 5．血吸煦性别发育过程中的基因表达谱分析 为获得新的血吸虫疫苗候选分子，对本课题组利用血吸虫雌雄虫eDNA消减文库 中的cDNA克隆制备的cDNA芯片进行杂交，研究分析血吸虫雄雌虫发育过程中基因 表达谱的变化。芯片质量分析显示，在对数据进行均一化处理后，试验所采用的芯 片杂交方法有较好的重复性和一致性。分析结果表明，该芯片3082个克隆中有2474 个呈现雌、雄虫差异表达。其中雄虫高表达1102个，雌虫高表达1372个。这些差 异表达基因在血吸虫不同发育阶段虫体上也呈现不同表达水平。雌、雄虫高表达的 基因分析表明，雄虫高表达的基因在14天到17天就出现变化，雌虫高表达的基因 则大都在20天到24天之间发生变化。测序的1l 水平相当。芯片聚类分析获得了一些表达时相一致的基因和不同时间高表达的基因。 用荧光定量RT—PCR对芯片杂交的可靠性进行验证，显示芯片