溶藻弧菌omp基因的克隆表达及dna疫苗的研制.pdfVIP

溶藻弧菌ompW基因的克隆表达及DNA疫苗的研制 摘 要 溶藻弧菌(Vibrio 是一种嗜温性、嗜盐性的革兰氏阴性菌，广泛分布于世界各地海水及河口处、海 洋动物中，是引起海水养殖鱼、虾、贝类爆发性弧菌疾病的主要病原之一。DNA 疫苗作为第三代疫苗在水产中的研究已具有悠久的历史，并取得卓越的成效，对 溶藻弧菌DNA疫苗的研究将为水产养殖业的健康发展提供一条可行之道。 本实验以实验室从湛江养殖区域内分离保存得到的溶藻弧菌有毒株为研究 对象，以该菌基因组为模板，采用改进后的热不对称交错PCR(Thermal Interlaced Asymmetric 得到的片段与载体进行连接，转化到DH5Q杆菌中，经蓝白斑、抗性筛选、菌 液PCR鉴定阳性克隆，将阳性克隆送生物公司进行测序。测序结果表明：获得 database中溶藻弧菌菌株外膜蛋白W ompW基因全长。获得的全长与GenBank 序列进行同源性分析，所得到序列同其他序列的同源性高达98％。 将经双酶切后的全长序列与原核表达载体pET-21a进行连接，构建重组质 粒，经抗性筛选、菌液PCR鉴定的阳性克隆送生物公司进行测序，