禽流感病毒基因片检测技术探索及其相关基础工作研究.pdf

中国农业大学 摘 要 禽流感病毒基因芯片检测技术探索 及其相关基础工作研究 摘 要 本研究内容包括三方面：(1)应用无特定病原体(sPF谫胚增殖禽流感病毒HI～H15 标准毒株，提取病毒RNA，运用RT-PCR技术扩增标准毒株的HA、NA、NP、M和NS 基因，克隆到PMDIS-T载体上，转化JM．109感受态菌，获得阳性质粒，并进行了鉴定 和序列测定。获得可以用来鉴别亚型的HI-Hll、H13～H15HA基因，NI-N6、N8、N9 亚型NA基因，以及用于型鉴定的NP、M和NS基因的阳性质粒，为基因芯片探针的制 备奠定了工作基础。(2)建立一种可以鉴定流感病毒的A型和1-15、H7、H9亚型RT-PCR 方法，流感病毒血清型的确定通过扩增M基因的一段保守序歹q实现，获得阳性片段为 1015bp：H5、H7、H9亚型的确认是通过扩增其血凝素保守序列获得，其片段大小分别 A／African 液作阳性对照样品．扩增结果完全相对应。(3)参照AIV标准血凝素序列：Aft44305 个靶DNA片段做探针，用来鉴别亚型，选择M、NS两个基因做阳性正对照靶DNA片 段，空白质粒(pUCl8)作系统阴性对照。点样，制