PCR-RFLP方法检测PARL基因Leu262Val多态性的实验研究.pdfVIP

昆 明 医 学 院 学 报 2011，(5)：27—30 CN 53—1O49／R JournalofKunmingMedicalUniversity PCR—RFLP方法检测PARL基因Leu262Val多态性的实验研究 代 莉 ”，李会芳 ，王玉明 ，宋滇平 ” (1)昆明医学院第一附属医院糖尿病科；2)检验科，云南 昆明 650032) [摘要] 日的 探讨聚合酶链反应 ～限制性片段长度 多态性方法 (PCR—RFLP)检测 PARL基 因 Lcu262Val多态性的最适实验条件．方法 在 PCR实验中，运用降落 PCR (touchdownPCR，TD—PCR)方法优 化PCR条件 ；对引物终浓度设定 0．8txmol／L、0．6txmol／L、0．4 m0J／IJ和0．32Izmol／1四个浓度梯度进行扩增 ； 通过2％琼脂糖凝胶电泳观察结果．在 RFIP实验中，在内切酶量 10U不变的情况下 ，PCR产物量分别设定为 5 I、10txL、15tzI；酶切时间分别设定为 12h、8h、4h、2h、1h酶切 ，反应完毕后通过2％琼脂糖凝胶电