aldh1a2结肠癌中的表达及对结肠癌细胞生物学的作用.pdf

ALDHlX 摘要 重要作用，在肿瘤演进等众多生理和病理过程中均发挥着重要的作用。研究发 现，在许多肿瘤组织中，都发现有较高MMP2的表达，且其表达程度与肿瘤的 侵袭性有关。E—cadherin是介导上皮细胞间粘附的主要粘附分子，主要介导同质 性细胞粘附，如瘤细胞与瘤细胞之间的粘附，因此E-cadherin表达减少，有助于 肿瘤侵袭转移。 本研究中，我们首先利用免疫组化技术、逆转录-PCR技术及免疫印迹技术 测定人结肠癌及癌旁组织中ALDHlA2、MMP2和E-cadherinmRNA及蛋白的表 达情况；随后利用基因扩增技术获得人ALDHlA2基因cDNA序列，构建 mRNA 及蛋白的表达，并利用紫外分光技术测定转染前后细胞中ALDHlA2的活性； 采用MTT实验、克隆形成实验、Transwdl小室侵袭实验、逆转录．PCR技术、 殖能力、克隆形成能力、侵袭能力的影响，并检测侵袭、粘附相关因子的表达， 同时用ATRA作为阳性对照；最后为进一步研究ALDHlA2在结肠癌的作用机 制，我们利用转染的细胞构建裸鼠移植瘤模型，观察不同裸鼠成瘤时间、瘤体 平均体积，平均瘤重的不同，探讨ALDHlA2在体内对结肠癌的影响，以期找 到ALDHlA2在结肠癌中的作用机制。本研究分为以下四个部分： 第一部分ALDHIA2在结肠癌中的表达及意义 方法： 蛋白的表达。 E．eadherin mRNA的表达情况。 E．cadhedn蛋白的表达情况。 结果： 1．免疫组织化学、逆转录一PCR及免疫印迹技术结果显示：ALDHlA2、 E．cadherin在结肠癌癌旁组织表达高于结肠癌组织，差异有统计学意义(氏O．05)。 摘要 MMP2在结肠癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义(氏O．05)。 A2基因过表达载体构建及鉴定 第二部分ALDHl 方法： 并进行酶切及基因测序鉴定。 细胞株LOVO细胞，并利用(3418进行筛选。 3．利用逆转录．PCR技术及免疫印迹技术测定转染前后细胞中ALDHIA2 mRNA及蛋白的表达。 4．利用紫外分光光度法测定转染前后细胞中ALDHlA2的活性。 结果： 1．酶切及基因测序结果表明成功构建pEGFP-N1一ALDHIA2表达载体 3．ALDHlA2 达高于未转染细胞。 转染细胞。 第三部分^LDHlA2基因过表达对结肠癌细胞生物学功能的影响 方法： 的变化。 2．克隆平板形成实验检测对照组、空载体组、ALDHlA2组及ATRA组细 胞克隆形成能力的变化。 组细胞侵袭能力的变化。 III 摘要 ALDHlA2、MMP2及E．cadherinmRNA含量。 MMP2及E．cadherin含量。 MMP2及E-cadherin蛋白的含量。 结果： 1．MTF法检测结果显示ALDHlA2过表达抑制LOVO细胞的增殖。 2．克隆形成实验显示ALDHlA2过表达降低了LOVO细胞克隆形成能力。 袭能力。 E．cadherin 及E-cadherin 计学意义(胗O．05)。 第四部分ALDHlA2基因过表达对移植瘤的影响 方法： 1．利用不同组别的LOVO细胞接种裸鼠构建移植瘤模型，观察不同组别裸 鼠成瘤时间、瘤体平均体积，平均瘤重的改变。 达。 结果： 鼠成瘤时间较对照组明显延长，差异有统计学意义(Po．05)，ATRA组瘤重也 较对照组明显减轻，差异有统计学意义(PO．05)。 无统计学意义(尸O．05)。 IV 摘要 结论： 高于癌旁组织，ALDHlA2、MMP2及E．cadherin三者密切相关。 2．成功构建并鉴定了ALDHIA2基因过表达真核表达载体，并获得稳定过 表达ALDHlA2的LOVO细胞。 3．ALDHlA2过表达具有抑制结