ac-sdkp矽肺纤维化作用的新靶向—肌成纤维细胞分化和差异蛋白的筛选.pdf

中文摘要 Ac．SDKP抗矽肺纤维化作用的新靶向 ——肌成纤维细胞分化和差异蛋白的筛选 摘 要 目的：矽肺是一种常见的职业性呼吸系统疾病。在我国，由于工业的 快速发展而防护性措施相对不甚完善，尘肺病的发病率仍然很高。到2010 中一半以上是矽肺病。矽尘做为潜在的致纤维化因子，可诱导肺泡巨噬细 胞的凋亡，并激活巨噬细胞介导的慢性炎症，释放大量酶和细胞因子，如 growth 转化生长因子(transforming 胶原合成和其他致纤维化因子表达的上调，以及抑制基质降解来促进细胞 外基质的沉积。作为致纤维化的重要细胞因子，TGF．p能够促进成纤维细 muscle 胞向特异性表达平滑肌肌动蛋白(a．smoothactin，仅一SMA)的肌成 纤维细胞分化，而这一过程受到血清应答因子(serum factor,SRF) response ’ ～ 的调控。 肽，可被血管紧张素转换酶特异性水解，使用血管紧张素转换酶抑制剂能 抑制器官纤维化(包括心、肾、肺)的功能。前期我们报道了，Ac．SDKP 能够抑制慢性炎症，下调TGF．p表达及其诱导的成纤维细胞增殖和胶原 合成，减轻矽肺大鼠纤维化的程度，具有拮抗矽肺纤维化的作用。 维细胞分化，进而抑制矽肺纤维化的发生、发展。并采用比较蛋白组学技 术，筛选出矽肺大鼠肺组织中的特异性差异蛋白以及Ac．SDKP对这些差 异蛋白的调节规律。进一步阐明矽肺发生的相关机制，寻找Ac—SDKP抗 矽肺纤维化的作用靶点，以期为开发Ac．SDKP作为一种新型的抗器官纤 维化的新药提供进一步的理论基础和实验依据。 方法：原代培养乳鼠肺成纤维细胞，并分为：1)对照组；2)TGF．131 中文摘要 尘制作大鼠矽肺模型，动物被分为：1)对照4周组；2)矽肺4周组；3) blot 预防治疗组。采用免疫组织化学染色、免疫细胞化学染色、Western 或Realtime 型胶原蛋白或mRNA的表达。 提取肺组织蛋白样品经双向电泳分离，胶体考马斯亮蓝染色显示蛋白 6．0图像分析软件对凝胶进行分析， 点。扫描输入计算机，用ImageMaster 差异蛋白判定标准为：该蛋白点在两组间(对照组4周、8周分别与矽尘 上下变化超过30％。将凝胶中的差异蛋白点切出，经胶内胰蛋白酶解，并 Laser 行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix．Assisted Timeof Mass Ionization Desorption／ Flight Spectrometry, MALDI．TOF．MS)获得肽质量指纹谱并对蛋白质进行分析。 ． 结果： I型受体、II型受 1一Ac．SDKP对TGF．pl诱导的肺成纤维细胞TGF．p 体的调节作用 I型受体、II型受体的表 TGF．D1能够显著上调肺成纤维细胞TGF．p 达，与对照组相比分别上调1．84和1．94倍。给予TGF．p受体阻断剂 I型受 体、II型受体的表达，‘分别为TGF．pl诱导组的76．83％和84．92％。 2 节作用