app转基因小神经干细胞的生物学特性及人参皂苷rb1的治疗作用研究.pdf

郑州大学2009年博士研究生论文 摘要 APP转基因小鼠神经干细胞生物学特性及 人参皂苷Rbl的治疗作用研究 博士研究生：李国栋 导 师：邢莹 郑州大学基础医学院 河南郑州450001 摘 要 阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种以记忆减退、认知障碍以及人 格改变等为临床特征的进行性痴呆，以大脑皮层和海马区域出现老年斑(Senile plaques，sP)、神经元纤维缠结(Neurofibrillarytangle，NFa3和营养不良性轴突的 改变为病理特征的老年神经变性。SP由B淀粉样蛋8(6．amyloidpeptide，AB)在细 胞外沉积造成，NFT主要成分是过度磷酸化的微管相关蛋白tau。A13沉积和tau 蛋白异常磷酸化是导致AD神经元丧失及产生痴呆症状的重要因素。但是这些病 理变化常常在患者死亡后尸体解剖才得以证实，而在患者的青年时期或发病早期 神经系统的病变机制尚不清楚，也使得AD患者难以进行早期治疗和疗效欠佳。 阿尔茨海默病的患病率随年龄增长而上升，且有明显的遗传倾向。资料显示， 大约30％的阿尔茨海默病患者有家族遗传性(称为家族性阿尔茨海默病，FAD)， 提示AD的发病是一个漫长的渐变过程。但在这个过程中，神经细胞的生长发育 特点和病理改变十分不清，尤其是那些携带有致病基因的神经干细胞(Neural stem cells，NSCs)、神经细胞的发育和生长的生物学特性尚待研究。 利用人脑NSCs或神经细胞来研究不同发育时期AD的病理特征和治疗方案 不仅取材困难，而且受着伦理道德的限制。复制AD的转基因动物模型，可以很 好地克服这些问题。目前国际公认APP转基因小鼠是最佳AD动物模型。APP 转基因小鼠是根据分子遗传学和胚胎学理论和技术，利用显微注射的方法将APP 基因片段整合入小鼠的基因组中，使得小鼠脑内表达人淀粉样前蛋白(amyloid l 郑州大学2009年博士研究生论文 摘要 precursor 增加，产生老年斑，从而造成小鼠老年性痴呆转基因模型。该模型为研究APP 代谢、AD的发生和发展及药物对发病进程的干预提供了良好的研究基础。 抑制A13沉积和tau蛋白异常磷酸化是治疗AD最根本的措施之一。目前AD 的传统治疗措施主要采用作用于胆碱能系统的药物、雌激素、神经营养因子、非 体拮抗剂、抗A13药物、改善脑代谢的药物等，但对AD均无满意的效果。我们 推测这可能至少有两方面的原因：一是AD的发病机制尚需进一步的探讨，二是 需要探索新的治疗药物和治疗时机。虽然已有报道表明，乙酰胆碱等神经递质的 变化在AD的发病过程中起重要作用、但是中枢众多的递质改变尚不清楚，尤其 是氨基酸类中枢递质和组胺递质在AD中的变化无人研究。因此，本研究首先采 用APP转基因小鼠作为研究对象，通过在体内外的研究探索APP转基因小鼠在 发育过程中，神经细胞的生长发育特征和中枢氨基酸类神经递质、组胺的动态变 化，进一步揭示AD的发病机制。 中药具有多途径、多靶点、多层次的整合效应，结合现代药理学的优势可能 为治疗AD找到的有效药物。人参皂苷Rbl是人参和西洋参的主要成分之一，具 有广泛的生理活性和药用价值，具有促智、抗氧化、提高免疫力和增强记忆力等 作用，尤其是在改善学习记忆能力和保护神经方面有很好的作用。本实验室前期 的体外实验中证实人参皂苷Rbl可以改善A1325旬5导致的Tau蛋白过磷酸化，也 有一些研究报道了人参皂苷Rbl对AB生成、代谢的影响，但所采用的AD模型 大多为铝制剂、半乳糖、A13等诱导，不仅不能较好地模拟体内病理改变，而且 还缺乏系统研究，尤其是对氨基酸类中枢递质和组胺递质的影响未见报道。因此， 本研究在APP转基因小鼠体内实验中，探索了Rbl对AD动物行为学、病理学 和神经递质表达的综合治疗作用，以期为AD的治疗寻求一条有效的途径。