as2o3和nga抗宫颈癌细胞的分子机制研究.pdfVIP

中文摘要 究 中文摘要 博士研究生：高鹏 导师：郑杰教授 东南大学医学院 宫颈癌是威胁女性生命的主要恶性疾病之一，其形成与高危型人乳头瘤病毒(human 细胞恶性转化和恶性表型维持所必需的。E6和E7的致瘤机制与它们对p53、pRb和p21等肿 瘤抑制蛋白表达或活性的抑制有关。因此，E6和E7成为理想的宫颈癌治疗靶点。研究发现， 三氧化二砷(arsenic acid，NDGA) 对宫颈癌细胞均具有显著的抑制效应，然而潜在的分子机制并不清楚。为此，我们以HeLa 细胞和正常细胞为实验对象对此进行了一些初步研究。 E7的转录也 As，O，处理48h能显著抑制HeLa细胞的生存并旱浓度依赖性，同时HPV-18 regulatoryregion, 受到显著抑制。E6和E7基冈的转录主要受基因上游的上游调节区(upstream URR)控制，该区域包含众多顺式作用元件。为了对As203在URR上的作用位点进行初步定 位，我们构建了6个含不同长度URR片段的CAT报告质粒。CATELlSA结果表明As203在 E6／E7转录的抑制效应可能是这些区段综合效 URR上主要有3个作用区段，As203对HPV-18 应的结果。同时，我们也注意到URR的5’段在此过程中起着非常重要的作用。然而，目前已 知的转录因子结合序列都集中在URR中段和近启动子段，所以有必要对URR的5’段上的转 录因子结合序列进行进一步的研究。 同As，O，一样，脂氧合酶抑制剂NDGA也具有抗病毒、抗肿瘤活性。我们发现，NDGA 处理72h能够显著抑制宫颈癌SiHa细胞等癌细胞的生存，且阻滞SiHa细胞的细胞周期于Gl 313等正常细胞的生存没有影响， 期，上述效应均呈时间和剂量依赖性。然而，NDGA对NIH 表明NDGA的抑制效应具有肿瘤特异性。p21是重要的细胞周期调节蛋白，也是肿瘤抑制蛋 白，常在宫颈癌中表达缺失。p21的转录水平主要与其启动子区域组蛋白的乙酰化水平及p53 等转录因子有关。我们发现，NDGA处理显著提高SiHa细胞内总体和p21基因启动子区域组 蛋白H3的乙酰化水平。然而，该效应具有基因选择性，因为NDGA对p27基因没有该效应。 forretinoidand mediator hormone 是 SMRT(silencing thyroid receptors) E6的表 基冈启动子区域组蛋白H3乙酰化的原因。据此，我们认为NDGA通过诱导p21表达抑制SiHa 细胞的生存，而p21表达的恢复与NDGA选择性上调p21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化 以及HPV-16 E6下调引起的p53蛋白水平上调有关。 关键词：宫颈癌细胞；入乳头瘤病毒；三氧化-li,t上游调节区；去甲二氢愈创木酸；组蛋 白乙酰化；p21 英文摘要 onMolecularMechanismofthe Study Effectsof andNDGAon AnticancerAs203 CervicalCancerCells