bcg-cpgdna和vaccae佐剂对乙肝疫苗免疫反应的影响及机制初探.pdfVIP

摘要 佐剂在疫苗的使用及发展中担负着重要作用。很多传统疫苗如果没有佐剂作 用，其免疫效果受到极大影响，特别是对一些新型疫苗(如DNA疫苗)的研发 或改进，有效佐剂是一个重要的突破点。迄今，人类研究的佐剂种类繁多，但人 (流感病毒亚单位佐剂疫苗)在欧洲各国获批准，但是美国食品药品管理局 (FDA)至今未予批准，我国国家食品药品监督管理局也是07年才批准其在中 已获欧盟专利，但在我国尚未批准上市。目前研究的众多佐剂中，尽管有些佐剂 具有较强的免疫刺激活性，但因毒副作用大而限制其临床研究。 中提取的天然CpGDNA，它除了具有一般CpG的良好免疫刺激活性，还因为 BCG作为疫苗在世界范围内沿用多年，证明其具有良好的安全性，而安全性正 是限制目前大部分在研佐剂进入临床研究的瓶颈。Vaeeae作为双向免疫调节剂， 有较好的免疫刺激效果，目前已有较多将Vaeeae联合乙肝疫苗治疗慢性乙型肝 炎的实验研究。本研究通过体外细胞水平实验和小鼠体内刺激实验，初步探讨上 述两种佐剂的免疫刺激活性，并将两种佐剂分别联合不含氢氧化铝佐剂的重组乙 响并初步探讨其作用机制。 利用体外细胞水平刺激实验和小鼠体内刺激实验，探讨CpG和Va的免疫刺 激活性。主要实验方法包括；1)佐荆对吞噬细胞吞噬功能的影响：采用碳粒廓 清实验，比较经CpG／va免疫的小鼠与未经佐剂免疫的对照组小鼠的吞噬细胞 吞噬功能是否存在差异；2)佐剂体外刺激试验：用CpG／va单独或联合ConA 泌水平，用MTT法测定体外培养68小时后的脾淋巴细胞的增殖能力，分析CpG ／va的细胞免疫刺激活性。 疫反应的影响、并初步探讨佐剂的作用机制。主要实验方法包括：1)病理学研 究：于免疫后不同时间采集经各组小鼠的注射部位肌肉、脾脏和淋巴结，制作组 织切片，进行HE染色，观察佐剂对组织的病理学影响；2)佐剂的抗原递送及缓 组织内I幕JHBsAg含量．时间变化趋势，分析佐剂是否存在抗原递送(antigen 含不同佐剂疫苗免疫小鼠后Thl型免疫应答的变化：4)佐剂对疫苗体液免疫应 答影响：于免疫后不同时间，采用EUSA法测定小鼠体液免疫应答水平，判断不 同佐剂对于抗原特异性抗体出现的时间以及量的影响。 佐剂的免疫刺激活性研究结果显示：1)CpG和V耐小鼠吞噬细胞的吞噬功 能影响不明显；2)CpG在体内、体外均能够诱导小鼠脾淋巴细胞分泌IFNq，并 激脾淋巴细胞分泌m．10。Va在体内、体外诱导IFN-／分泌的能力不明显，但能诱 导分泌高水平的IL-10，并能增强Co删激脾淋巴细胞分泌FN--y的能力，抑制 增殖。由上述结果可以初步判断CpG具有诱导Thl型细胞免疫刺激的活性，而Va 则能够诱导Thl型和Th2型细胞免疫应答。 佐剂联合重组乙肝疫苗研究结果显示：I)cpG和Va有增加注射部位肌肉炎 细胞浸润的趋势；2)CpG和Va*身具有轻微的抗原缓释作用，在免疫后1天时， 用增强；4)含CpG佐剂的重组乙肝疫苗在免疫后7天能有效诱导小鼠脾脏淋巴细 能力大于单独va佐剂组(也大于单独灿佐剂组)，加强免疫l针后的阳转比例有 lJ g 所升高；并且Thl型细胞免疫应答水平与HBsAg剂量有关，抗原免疫剂量为3 lJ 的组别在免疫后7天阳转比例大于抗原免疫剂量为lg的组别：5)CpG和Va均能 单独使用HBsAg相比，能够提早血清抗体的产生，并使抗体滴度提高。 4 综上所述，这两种佐剂均具有一定程度的细胞免疫刺激活性。作为佐剂对于 乙肝疫苗免疫后的抗原递送和缓释具有一定作用，并且能够提高小鼠对重组乙肝 疫苗的细胞免疫应答和体液免疫应答水平，有望作为疫苗佐剂。 【关键i百-J]佐剂；BCG．CpG—ODN；VaccaeHBsAg；乙肝疫苗 Abstract aSSUrGCSan rolein Adjuvant