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BRD邢蛋白的表达研究 中文摘要 多年来，人们一直致力于肿瘤疫苗靶的研究，发现了一系列在正常睾丸及 testis 恶性肿瘤细胞内高度限制性表达的基因，即肿瘤一睾丸基因(cancergene， CT基因)，这种基因因其限制性表达且部分表达产物可诱导机体产生体液和／ 或细胞免疫的特点被认为是理想的肿瘤疫苗靶。 testis BRDT-NY基因是CT基因CT9(Br0Ⅱlodomain specificgene，BRDT基 究发现：BRDT_NY基因特异表达在人睾丸组织中，其他组织未见表达。目前， 对BⅪ)T-NY蛋白的表达研究国内外均未见报道。 本研究目的如下：原核表达BRD州基因不同功能结构域的三种蛋白， 用这三种表达产物分别免疫小鼠，获得三种小鼠抗人BRDT-NY蛋白多克隆抗 体。应用免疫组织化学方法对正常成人睾丸组织进行表达研究，观察三种 提供线索；研究BImT-NY蛋白在不同种类肿瘤、不同分化程度的同类恶性肿 瘤细胞中的表达情况，以探讨BRD州蛋白作为肿瘤疫苗靶的可能性。 具体研究内容分为以下三部分： 一、BImT-NY基因片段的克隆、表达及表达蛋白的纯化 参照BRDT-NY基因全长序列，设计三对针对其不同结构域的蛋白表达引 BRD姗蛋白，并对其进行纯化、复性。 二、鼠抗人BRDT—NY蛋白多克隆抗体的制备 BRDT-NY3蛋白的特异性抗体，为进一步的实验研究奠定了基础。 W色Stem-blot显示：仅Ab 蛋白，可应用于下面的免疫组织化学实验。 三、BImT-NY蛋白在组织中的表达研究 正常成人睾丸组织、部分肿瘤组织(共44例)中的表达情况。 正常成人睾丸组织免疫组化实验结果显示：BRDT．NY蛋白主要定位于圆形 精子细胞的细胞核，而在其他生精细胞中未见表达或仅有微弱表达。这一结果 表明BRDT-NY很可能在人精子细胞变态阶段起作用，这为我们进一步研究其 在睾丸中的功能提供了线索。 肿瘤组织中免疫组化实验结果显示：BRDT-NY蛋白广泛表达于多种恶性肿 瘤细胞。 蛋白在食管癌和胃癌中表达阳性率均较高，且与非肿瘤组织有显著性差异，有 望作为这两种肿瘤诊断和治疗的分子靶。 常乳腺组织中表达的阳性率均较高，但无显著性差异，因此尚不能作为乳腺癌 治疗的分子靶。但其在乳腺癌和正常乳腺组织中表达的定位明显不同，有可能 作为乳腺癌的病理诊断提供新的佐证，这还需扩大病例数量进一步研究。 5例结肠癌、3例甲状腺癌、l例肺癌及1例卵巢癌中，BI①州蛋白表 达均为阳性；而在癌旁非肿瘤结肠组织和癌旁非肿瘤甲状腺组织中均未见 BI①州蛋白表达。因此B砌)T-NY蛋白的检测对于这几种肿瘤诊断可能具有 一定意义，但能否成为其诊断和治疗的分子靶还需扩大标本例数进行进一步研 究。 综上所述，BRDT—NY可作为肿瘤疫苗靶的候选成分。 关键词：BIm州蛋白，表达研究，肿瘤，CT基因 The ofBRDT0叮YProtein ExpressionStudy Abstract 111me hasbeena forcallcerVaccine pastmallyyears，也ere contiIluir唱search meir tissue·restricted testisaIldtllevarious ta唱ets．Ov血培t011igldy expression证me are aS for mali驴ancies，CTantigensbeingVigorouslypursuedtargets