6种抗瘤中药制影响colon26肿瘤细胞免疫抑制及相应靶分子分泌的研究.pdf

中文摘要 6种抗瘤中药IIII 影响Colon26肿瘤细胞免疫抑制及相应靶分子分泌的研究 摘 要 目的：肿瘤细胞分泌免疫抑制分子抑制免疫功能逃避免疫监视，是肿 瘤发生发展的重要机制。许多肿瘤生物疗剂和化疗药剂体内抗瘤效果欠 佳，与肿瘤局部形成的深度免疫抑制状态密切相关。研究发现，某些肿瘤 细胞培养上清具有免疫抑制作用，是其分泌的免疫抑制分子造成；可见于 肿瘤细胞分泌的免疫抑制分子，报道较多的是转化生长因子(TGf)§l、 免疫，T细胞和NK细胞功能至关重要：肿瘤免疫抑制，主要是通过对T 细胞和NK细胞的抑制介导。研究下调肿瘤免疫抑制及其相关分子分泌， 寻找能够逆转肿瘤免疫抑制的有效药物，是开发抗瘤药物、明确其抗瘤免 疫机理和指导临床合理应用的重要方面。 中药抗肿瘤是我国抗瘤药物研究的优势领域；临床应用中药治疗或辅 助治疗肿瘤，与其他肿瘤疗剂特别是化疗药剂相比，多途径、多靶点、低 毒、有效、价廉、不对机体和机体免疫系统造成损伤，更显示出其广阔的 临床应用前景。但以往的研究资料多是针对中药上调机体免疫功能指标、 诱导肿瘤细胞凋亡或分化、直接杀伤或抑制肿瘤细胞生长等方面，而对其 影响肿瘤细胞的免疫抑制及相关分子的分泌，从逆转肿瘤免疫抑制角度揭 示其抗瘤机理相对系统的研究，目前国内外尚无报道。 本课题旨在原有工作基础上，试验选用其培养上清确有免疫抑制作用 的小鼠结直肠癌细胞株Colon26肿瘤细胞，检测其经6种抗瘤中药制剂分 别对之作用后再培养的上清对免疫功能的影响和上清中免疫抑制分子的 含量，初步探讨不同类型中药制剂下调肿瘤免疫抑制与影响肿瘤细胞分泌 免疫抑制分子类别之间的关系；从逆转肿瘤免疫抑制的角度揭示这些中药 制剂的抗肿瘤免疫作用机制；为进一步探索靶途径、靶位点，开发具有我 国自己特色和自主知识产权的抗肿瘤中药疗剂，指导临床合理应用，奠定 实验基础和提供理论依据。 中文摘要 和CD38一掣表达5项免疫功能指标的影响。选用三氧化二砷(As：03，As)、 篱甲醚(ART)6种抗瘤中药制剂，分别制备不同中药制剂作用48h后，’ 洗涤去除中药制剂，再连续两次用新鲜培液作48h再培养的Colon26肿瘤 细胞和其培养上清，以及不经中药制剂作用的相应同步处理和培养的 Colon26肿瘤细胞和其培养上清作对照：实验研究这些上清对小鼠脾细胞 IL．10和VEGF5种免疫抑制分子的含量；RT-PCR法检测经上述不同方法 表达；将中药制剂作用后再培养的Colon26肿瘤细胞上清免疫抑制及免疫 抑制分子含量列表进行专业比对分析，以最大相似性推测两者的关系；对 专业分析推测的结果，进行多因素相关统计分析给予佐证，确定抗瘤中药 制剂下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制的相应靶分子；根据上述专业分析和 统计分析确定的各抗瘤中药制剂影响Colon26肿瘤细胞免疫抑制及其相 应靶分子关系，以最大相似性专业分析6种抗瘤中药制剂彼此之间是否存 在不同、相同或相近的作用模式。 结果i 1Colon26单纯肿瘤细胞培养上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标的 影响 在以培液代替Colon26肿瘤细胞培养上清进行作用的正常对照组 e—P细胞的百分率分别为 表达阳性细胞、CD3￡+r细胞和CD3 所检测的这5项免疫功能指标明显受抑，分别为57．88％士7．38％(P 1％(JP 0．00051、0．21±0．08(PO．0005)、639％土1．08％(P0．0005)、4．59％士O．3 5％：k2．17％、23．34％土2，86％。 68．30％土10．44％、69．60％土5．15％、68．1 2中药制剂作用Colon26后再培养上清对小鼠脾细胞5项免疫功能 中文摘要 指标的影响 对NK杀伤、ConA诱导转化和CD3e+F表达的抑制作用明显回升(分别 (均P0．05)；对IL．2RQ和CD3￡。壤达的抑制无显著变化(均P