530nm单色照射对体外培养的m#252;ller细胞生长及细胞因子表达的影响.pdf

530nm 单色光照射对体外培养的Müller 细胞生长及细胞因子表达的影响 中文摘要 530nm 单色光照射对体外培养的Müller 细胞生长 及细胞因子表达的影响 中文摘要 研究背景与目的 我国近视眼的发生率呈逐年增高趋势，已成为严重的社会公共问题。目前对近视 眼的病因及发病机制尚不完全清楚。多年来用于近视眼研究的动物模型主要有形觉剥 夺和光学离焦性动物模型。近年来研究表明单色光照射可诱导动物产生近视眼，可能 成为一种新的近视眼模型，其诱发机制尚不清楚。视网膜 Müller 细胞是视网膜上最 主要的神经胶质细胞之一，通过合成与分泌多种细胞因子参与视网膜的病理、生理过 程。形觉剥夺性近视眼动物模型的研究表明，视网膜 Müller 细胞可能通过改变细胞 因子的合成与分泌，参与近视眼的形成。在单色光照射诱导近视眼发生的过程中视网 膜 Müller 细胞是否发挥作用，以及它所分泌的细胞因子会产生怎样的改变，体外实 验尚无此方面的研究。本实验采用单色光照射体外培养的永生化大鼠视网膜 Müller 细胞，初步研究530nm 单色光对Müller 细胞生长及细胞因子表达的变化。 方法 1.光镜下观察视网膜Müller 细胞在不同光照度作用下的细胞形态，MTT 比色法检测 视网膜 Müller 细胞在不同光照度作用下的生长曲线，流式细胞术（FCM ）检测不同 光照度作用后视网膜Müller 细胞的细胞周期。 2.逆转录聚合酶连反应（RT-PCR ）和蛋白质印迹法（Western-Blot ）分别检测 530nm 单色光在不同光照度作用 Müller 细胞后，转化生子因子- β1 （transforming growth factor-beta 1, TGF-β1 ）的表达。 3. RT-PCR 和Western-Blot 分别检测530nm 单色光在不同光照度作用Müller 细胞后， 诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase ，iNOS ）的表达。 4. RT-PCR 、Western-Blot 和免疫细胞化学染色法检测530nm 单色光在不同光照度光 照Müller 细胞后，碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF ）的 I 中文摘要 530nm 单色光照射对体外培养的Müller 细胞生长及细胞因子表达的影响 表达。 5.免疫细胞化学法检测 530nm 单色光在不同光照度光照作用后视网膜Müller 细胞促 凋亡蛋白Bax 和抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达。 结果 1.光学显微镜下观察：视网膜Müller 细胞经不同光照度作用后，其细胞形态均呈典型 的多角形，细胞大小均匀，边界清晰。125LUX、250LUX 组与对照组比较生长曲线 无明显改变 （p =0.117 ），500LUX 组光照12h、24h 后生长曲线增长减缓 （p 12=0.013 ， p 24=0.001 ）。流式细胞术检测各光照组细胞G2/G1 值均降低，500LUX 组明显降低， 与对照组、250LUX 组比较差异具有统计学意义（p =0.028 ，p =0.038 ）。 2. TGF- β1 的表达：RT-PCR 结果显示，250LUX 组TGF- β1 的表达显著高于500LUX 组 （p =0.006 ）；Western-Blot 结果显示，125LUX、250LUX 、500LUX 组A 值均降低， 以500LUX 组下降最为显著，组间比较差异具有统计学意义 （F=31.816，p ＜0.01 ）。 3. iNOS 的表达：RT-PCR 结果显示，125LUX、250LUX 组iNOS mRNA 表达依次上 调，250LUX 组与对照组比较差异具有统计学意义（p =0.001 ），500LUX 表达下调 （p =0.000 ）；Western-Blot 结果显示，iNOS 蛋白表达，125LUX、250LUX 、500LUX 组 A 值均降低，以 250LUX 组下降最为显著，组间比较差异具有统计学意义