dpc4基因对肠癌细胞侵袭和转移的影响及其机制的研究.pdf

摘要 前言：结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋 势。转化生长因子B(transforminggrowth 机体的免疫调节、细胞生长和分化、细胞外基质的合成和储存等方面发挥着十分 重要的作用，但是上皮源性的恶性肿瘤细胞丧失了对TGF—B的反应性 而逃避TGF—B的生长抑制作用，结果导致肿瘤发生。DPc4被认为是 一个重要的肿瘤抑制基因。DPC4是TGF—B信号转导途径的中心分子， 几乎所有生物学效应均是DPC4与不同的Smads蛋白相互作用的结果。 尽管有关DPC4的研究内容已积累了很多，但是DPC4功能的失活对结 肠癌细胞侵袭和转移有何影响却知之甚少。 目的：研究DPc4基因对结肠癌细胞侵袭和转移的影响，探讨DPc4 在结肠癌发生和发展中的作用及机制。 方法：采用免疫组化S—P法检测了70例标本(包括正常结肠粘膜、 blot 通过细菌转化、酶切、凝胶电泳、基因重组技术等方法构建 疫组化S—P法和westernblot分析检测三组细胞中DPC4的表达：通 过生长曲线和平板克隆形成实验检测转染细胞增殖的改变；采用流式 细胞术检测转染细胞S期细胞百分数(s％)和凋亡率的改变；采用 染细胞的迁移能力和侵袭能力；腹腔移植法建立裸鼠结肠癌细胞转移 模型；用明胶酶谱分析方法检测删P一2、MMP一9活性的改变。 结果：DPC4蛋白阳性信号定位于细胞质及胞核。在正常结肠粘 膜和结肠腺瘤中，DPc4呈强阳性表达，阳性细胞分布在粘膜全层中。 在结肠癌组织中，DPc4蛋白表达下降，其分布及着色程度呈异质性， 其中高分化腺癌尚有部分表达，低分化腺癌及转移癌表达明显下降， 有的甚至无表达，表明DPC4在结肠肿瘤中的表达情况与肿瘤分期、 分化程度及转移有关；筛选出HcTll6细胞株没有DPC4表达；成功构 隆形成率、细胞粘附率、迁移能力和侵袭能力明显降低(尸0．01)； 表面及切面均可见大量癌结节，而DPC4+_HCTll6细胞组裸鼠腹腔内、 肝脏表面及切面的的癌结节很少；MMP．2的活性在三组细胞没有区别，但 的活性明显下降。 结论：1．DPC4的低表达可能与结肠癌的发生、发展过程相关； 的细胞模型； 3．DPC4可能抑制了结肠癌细胞的侵袭和转移； 4．DPC4对结肠癌细胞增殖的调控可能是通过DPc4抑制细胞的生 长和诱导细胞的凋亡两方面的作用实现的： 5．删P一9可能是DPC4的下游调控基因。 关键词DPC4，结肠癌，侵袭，转移，MMP一9 II ABSTRACT colorectalcarcinomais PrefaceThe tumorof a丘equentmalignant itsincidenceis tract，and upyearby digestiVe going year．TGF—p an rolem imponantmodulating (Transfo加inggrow山factor-lj)plays cell immune di髓rentiationand response，regulating so extracellularmatrixfbmation，andon．However，epithelialderived cellshaSoRenlost the