oct-4在精干细胞定向诱导分化中的表达及其甲基化的研究.pdf

摘 要 目的：体外分离培养小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,mSSCs)， 并通过干细胞因子（SCF, stem cell factor ）诱导其向精母细胞方向分化，观察小 鼠精原干细胞在诱导分化前后Oct-4 的表达情况，并检测其甲基化状态，为进一 步研究Oct-4 在mSSCs 分化中的作用以及探讨表观遗传修饰调节对干细胞分化 的影响提供研究思路。 方法：采用与支持细胞共培养法，分离培养6～8 天BABL/C 小鼠的SSCs，培养 48h 时用含10 % FBS 和50ng/mL SCF 的L-DMEM 培养基对mSSCs 进行诱导分 化，观察mSSCs 加入诱导剂前后的形态学变化，用c-kit、GCNF 的表达鉴定mSSCs 是否发生分化。分别采用RT-PCR 和间接免疫荧光染色技术，从mRNA 和蛋白 水平检测Oct-4 在mSSCs 诱导分化前和分化后2 d 、5 d 的表达情况，运用甲基 化特异性PCR 检测Oct-4 在mSSCs 诱导分化前和分化后2 d 、5 d 的甲基化状态。 结果：1、形态学观察mSSCs 细胞核较大，细胞质少，SCF 诱导培养后，随着培 养时间的延长，细胞克隆逐渐增长缓慢，并出现衰退、凋亡的细胞；2 、