中药显微鉴别技术讲义3要点.ppt

第三部分 显微制片技术 在进行显微鉴别时，首先要将“检样”制成适于镜检的标本。对于完整的药材可制成各种切面的切片；对于粉末药材(包括丸、散等成方)可直接装片或作适当处理后制片。 永久片制作技术 临时制片技术 1、制片设备滑走切片机——半自动切片机 2 变倍体视显微镜 是一种具有立体感觉的显微镜。 主要用途： 作为动物学、植物学、昆虫学、组织学、矿物学、考古学、地质学和皮肤病学等的研究和解剖工具。 电脑型连续变倍体视显微镜 SZX-16 研究用 电脑（数码相机）型连续变倍体视显微镜 它观察物体时能产生正立的三维空间像，立体感强，成像清晰和宽阔，具有较长的工作距离，，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规显微镜。 对同一物体可实现连续放大倍率观看,可能直接电视机或电脑上观察实物图像。 数码型透射光生物学显微镜 4、偏光显微镜 偏光显微镜 偏光显微镜(polarizing microscope) ?用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等。和普通显微镜不同的是：其光源前有偏振片（起偏振器），使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中装有另一偏振片（检偏振器，一个偏振方向与起偏振器垂直的起偏器），这种显微镜的载物台是可以旋转的，当载物台上放入单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。 在偏光显微镜下，药材的鉴别要素在色彩上表现出一定的变化，可作为大多数植物、动物、矿物类药材的显微鉴别 依据之一。如植物的淀粉在偏光显微镜下呈现黑十字现象，不同类型的淀粉其黑十字形象不同（图2）；草酸钙结晶类型多样，在偏光显微镜下呈不同的多彩颜色（图2）；石细胞在植物体内广泛分布，其细胞壁在偏光显微镜下呈亮黄色或亮橙黄色；纤维、导管在偏光显微镜下则呈强弱不同的色彩；动物的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈现出不同的偏光特性；矿物类物质多具有偏光特性。 偏光下的草酸钙晶体与淀粉粒 5、倒置生物学显微镜 6、扫描电子显微镜 扫描电镜工作原理 扫描电子显微镜（简称扫描电镜） 分辨率高，放大倍率5~100,000，能使物质的图像呈现显著的表面立体结构特征，样品制备操作又较简易。在药材鉴定，特别在同科属种间的表面结构的鉴别比较上，已成为一种新的手段。 如：扫描电子显微镜用于研究花粉粒、种皮和果皮的表面纹饰，茎、叶表皮组织的结构(毛茸、腺体、气孔、角质层、蜡层、分泌物等) 的细微特征，木类药材的解剖以及动物体壁、鳞片及毛等的鉴别。 小孢子囊及小孢子微形态差异 十三种卷柏大孢子微形态差异 使用显微镜的注意事项 合理制片，盖玻片上不得有试液残留，避免污染物镜及载物台，损伤镜头。 转动物镜转换器，由低到高逐级变换、选用合适放大倍数的物镜观察。 使用40倍物镜时，可用细螺旋调节焦距，禁止用粗螺旋调节；也不得移动载玻片。 根据观察物象，选择偏光条件确认特征。 用毕，应将最小物镜与通光孔相对，关闭光源，罩好，收置起来。 显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭。 7、常用制片法 ——永久片制作技术 药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久切片)，因制成的石蜡切片外形较完整，厚薄均匀，且可制得连续切片，观察时方便，又能长期保存。但由于制片技术较复杂，费时太多，不适用于日常检验。 常用制片法 ——临时制片技术 徒手切片或滑走切片法： 表面装片：为观察叶类、花类及全草类药材的叶片、花冠、萼片、苞片等的表皮组织及其附属物的特征。 解离组织装片：可清楚地观察比较坚硬的细胞组织，如导管、纤维、石细胞等的形态。 花粉粒与孢子制片法：观察花粉粒、孢子等的形态特征或构造，需用花粉粒与孢子制片法制片。 磨片法：观察矿物药或较坚硬的动物类药材如珍珠、石决明及动物骨骼，可采用磨片法制片。 7.1 仪器和用具 仪器 生物学显微镜（最好具有2.5×或4×物镜头及偏光装置）、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。 用具 放大镜、刀片、镊子、剪刀、解剖针 载玻片、盖玻片 7.1 仪器和用具 吸湿器（即玻璃干燥器改装成底部放入蒸馏水加微量苯酚防霉，上部瓷板上置药材样品，利用潮气润湿药材样品） 培养皿或小烧杯、酒精灯、试管，试管架、滴管、玻璃棒、乳钵、绸布、滤纸、火柴等。 7.2 试液——封藏剂 7.2.l 水合氯醛