哺乳动物的基因工程精要.pptVIP

大众法被废止？不是被修改了吗？ 工程一班 刘思平201220141262 哺乳动物的基因工程 Part 1 高等哺乳动物基因工程的基本概念 哺乳动物的基因工程 高等哺乳动物的受体系统 Part 2 高等哺乳动物的基因转移 Part 4 高等哺乳动物的载体系统 Part 3 Part 5 利用哺乳动物工程细胞生产重组蛋白 哺乳动物基因工程的基本概念 动物基因工程指利用DNA重组技术对动物所进行的工程操作。遗传学角度分为遗传和非遗传即遗传性动物基因工程和转基因技术。 遗传性基因工程作用动物工程细胞。为蛋白多肽物质大规模生产药物筛选研究模型 转基因技术作用动物个体。遗传性状改良，人体基因治疗。 02 高等哺乳动物受体细胞的条件 03 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 01 高等哺乳动物细胞的生长特性 04 常用的高等哺乳动物受体细胞 高等哺乳动物细胞的受体系统 锚地依赖性：细胞必须附在固体上或 固定的表面才能生长分裂、 血清依赖性：细胞必须具有生长因子才能生长 接触抑制性：细胞与细胞接触后，生长便受到抑 形态依赖性：细胞称扁平状，并有长纤维网状结 正常的哺乳类动物细胞具有下列四大生物学特征： 上述特征使得正常的哺乳动物细胞在体外培养中，一般只能存活50代 且在培养皿上以平面的形式生长，即单层细胞生长。有时，正常细胞 会改变某些特征而越过生理临界点，继续增殖并无限制分裂，这种状 态称为细胞系形成，此时的细胞成为细胞系。 02 高等哺乳动物受体细胞的条件 03 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 01 高等哺乳动物 04 常用的高等哺乳动物受体细胞 高等哺乳动物细胞的受体系统 以高效表达外源基因为目标的高等哺乳动物受体细胞应具备下列条件 细胞系特征 丧失细胞接触抑制性和锚地依赖性特征，便于大规模培养 遗传稳定性 外源基因多次传代后不至于丢失，易于长期保存 合适的标记 便于转化株的筛选和维持 生长快且齐 分裂周期短，生长均一，便于控制 安全性能好 不合成分泌致病物质，不致癌 大多数正常的高等哺乳动物细胞并不能同时具备上述条件，癌细胞能满足上述前四项要求，但在安全性能上有欠缺。 02 高等哺乳动物受体细胞的条件 03 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 01 高等哺细 04 常用的高等哺乳动物受体细胞 高等哺乳动物细胞的受体系统 1. 营养缺陷型的哺乳动物受体细胞 2. 哺乳动物受体细胞的抗性基因选择标记 1.胸腺嘧啶核苷激酶基因（TK）TK合成TMP，氨基嘌呤筛选 2.黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因（XGPT-）XGPRT合成GMP，用酶酚酸筛选 3.氨基葡萄糖苷3‘-磷酸转移酶基因（APH-）APH灭火G418，用G418筛选 4.二氢叶酸还原酶基因（DHFR）DHFR变体抗氨甲喋呤,用氨甲喋呤筛选 从头合成：从简单的前提物质开始进行合成 补救合成：利用游离的碱基、核苷进行合成 嘌呤和嘧啶有各自独立的合成途径，皆可被特定药物阻断。 02 高等哺乳动物受体细胞的条件 03 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 01 高等哺乳动物细胞的生长特性 04 常用的高等哺乳动物受体细胞 高等哺乳动物细胞的受体系统 高等哺乳动物受体细胞主要还是中国仓鼠卵巢细胞（CHO），原因是 遗传背景清楚，生理代谢稳定 与人的亲缘关系接近，外源蛋白修饰准确 基因转移和载体表达系统完善 耐受剪切力，便于大规模培养 被美国FDA确认为安全的基因工程受体细胞（GRAS） 腺病毒科为无包膜线状双链DNA病毒，分哺乳动物腺病毒和禽腺病毒两个属。目前已鉴定的人腺病毒有6个亚属，其中常用来构建载体的主要是C亚属的2型（Ad2）和5型（Ad5）病毒。腺病毒感染人细胞时呈裂解型，不致癌；但对啮齿目动物来说，绝大多数的腺病毒成员均能致癌。 猿猴病毒DNA（SV40） 人牛痘病毒DNA 人乳多瘤病毒（BKV）属于乳多瘤病毒科乳头瘤病毒属， 其基因组为双链DNA，感染宿主细胞后基因不发生整合， 独立于染色体而自主复制，每个宿主细胞最高可达500个 拷贝。 人牛痘病毒是一个大型DNA病毒，基因组长185 kb，能在宿主细胞质中自主复制。以前外源基因插在病毒基因组的非必需区内，构建出的重组病毒具有感染力，而且一经转染，外源基因即可在最邻近的病毒启动子的控制下高效表达。然而由于牛痘病毒基因组较大，体外DNA重组很困难，因此通常采用体内重组的方式进行。 SV40属于乳多瘤病毒科多瘤病毒属，呈小型二十面体，由VP1、VP2、VP3三种衣壳蛋白包装而成，基因组为5224bp的双链环状DNASV40可以与所有哺乳动物宿主细胞中的组蛋白H2、H3、H4结合，从而使其DNA形成类似核小体的微型染色体结构。 SV40感染猴细胞时呈裂解型，不致