利用Red系统快速敲除家蚕核型多角体病毒orf60基因.pdfVIP

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2016-03-05 发布于安徽
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利用Red系统快速敲除家蚕核型多角体病毒orf60基因.pdf

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卷期生物工程学报 ! # ’() *! +( *# 年月 !$$% !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-./-01-2 !$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用!# 系统快速敲除家蚕核型多角体病毒 !# 34 基因 !$%# ’()*%+,- ,. $!%’( %!) /*01,%,123#),4)*( !# 34 52 !# !0,65-$+,- 72(+6 王强，郭忠建，姚勤，王海燕，陈克平，，， T+U V59:D UHW X@(:DO859: YW V5: T+U F95OY9: 9:7 MFQ+ Z-OL5:D 江苏大学生命科学研究院，镇江 !=!$= ，，， 5$/#/)/% (- 6#- % 70#%$0% ’#+$1) 8$#9%*#/2 :%$; #+$1 !=!$= !#$+ 摘要用重组系统和最近构建的家蚕核型多角体病毒（）在大肠杆菌中快速地敲除 3-7 K0+L’ 194057 KT!#== K0+L’ (*- 34 基因。从大肠杆菌K0[F=$K94 中提取 K0+L’ 194057，将其电转化到含有质粒 .Z[\J （能表达 3-7 重组酶）的大肠杆菌菌株中，获得了可用于基因打靶的菌株。设计一对长的引物（端为基因的左右同源臂， KT!#== K0+L’ KT!#==OK94 J1. #] (*- 34 长；端长，为氯霉素抗性基因（）的首尾序列），以质粒（含）为模板，扩增携带左右同源臂的 \#1. ] =I1. 0+/ .Z[ 0+/ LM3 (*- 34 0+/ ，即打靶线性化片段。将该线性化片段电转入KT!#==OK94 菌株，在3-7 重组酶的作用下，线性化片段与K0+L’ 194057 中的基因发生同源重组。设计对特异引物，用方法证明成功地替换了基因。重组转 (*- 34 LM3 0+/ K0+L’ (*- 34 194057 [+ 染细胞后，分析未检测到基因的表达。 K0+ T-A/-2: 1)(/ (*- 34 关键词重组系统，，基因敲除 3-7 (*- 34 中图分类号文献标识码