补肾益气活血方对小鼠子宫内膜整合素β3、粘蛋白-1表达影响.pdfVIP

补肾益气活血方对小鼠子宫内膜整合素β3、粘蛋白-1 表达的影响∗ 1 吴云霞 ，黄光英，龚萍 （华中科技大学同济医学院附属同济医院中西结合研究所，武汉430030） 1E-mail ：wyx7419@ 摘 要：目的：探讨中药补肾益气活血方促进着床的机理。方法：在以吲哚美辛建立小鼠着 床障碍模型的基础上，将动物分为正常组，吲哚美辛组，中药组和黄体酮组，用免疫组织化 学及 Western-blot 方法检测各组小鼠妊娠 d5（着床窗口期）子宫内膜整合素β3、粘蛋白 -1 表达。结果：补肾益气活血中药对整合素β3 表达无明显影响，但有抑制粘蛋白-1 表达 作用，黄体酮既能促进子宫内膜整合素β3 表达、又能抑制粘蛋白-1 表达。结论：提示中药 补肾益气活血方通过抑制植入窗期子宫内膜 Muc-1 蛋白表达，消除着床黏附前子宫内膜与胚 泡之间的立体空间位阻，促进黏附，从而促进着床，黄体酮则更有利于促进胚泡粘附。 关键词：补肾益气活血方; 整合素β3；粘蛋白-1 正常子宫内膜仅在一个极短的关键时期内允许胚胎着床，这一时期代表子宫 内膜接受性最高，称为“着床窗”，着床窗口期常有一些特异性的蛋白质增加出 现或减少以至消失，监测这些生化标志物的存在，有助于了解子宫内膜接受性。 整合素β3(integrin-beta3, β3)和粘蛋白-1 （mucin-1,Muc-1 ）即是近年大家研究较 多的称为着床期子宫内膜容受性标志分子，β3 在着床d5 开始在子宫内膜高度表 达[1] [2] ，而Muc-1 则该天在子宫内膜表达突然消失 。前期研究已经证明补肾益气 活血方能提高实行IVF-ET患者临床受孕率，提高小鼠着床率，本研究拟通过检 测d5 小鼠子宫内膜β3、Muc -1 的表达，以探讨该方提高着床率的机理和对子宫 内膜容受性的影响。 1 材料与方法 1.1 实验动物：选用清洁级昆明小鼠，年龄 8~12W，体重 20~25g ，未交配，由 湖北省卫生防疫站提供。置于室温 18~22℃，相对湿度 70~85% 的动物房内，雌 雄分笼饲养，自由摄食，饮水，10h 光照。 1.2 实验用药与主要试剂：吲哚美辛肠溶片，25mg*100 片，批号：冀卫药准字 （1996）第 040137 号，中国河北邯郸滏荣制药有限公司生产。黄体酮针剂 5mg/ml/ ∗ 高等学校博士学科点专项科研基金资助,NO:20020487058 作者简介：吴云霞，女，30 岁，博士。研究方向：中西结合妇科。Tel E-mail ： ； -1- 支，苏卫药准字（1983）第 310701 号，哈药集团第二制药有限公司生产。补肾 益气活血方由同济医学院中西医结合研究所中药制剂室提供，由续断、桑寄生、 黄芪、当归、丹参等按一定比例制成 3.75mg/ml 无菌煎剂，密封，4 ℃保存。SP 试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，β3 兔抗小鼠多克隆抗体，免疫印迹化 学发光试剂 ECL （美国Santa Cruz 公司），Muc -1 金黄仓鼠抗小鼠单克隆抗体和 羊抗金黄仓鼠 IgG （晶美公司产品）总蛋白质定量试剂盒 （美国 Bio-Rad 公司）， 多聚甲醛，氯化钠，去氧胆酸钠等常用化学试剂（北京化学试剂公司）。 1.3 实验仪器：普通显微镜 （OLYMPUS CHK ，Japan ），切片机 （LEICA RM2135 ， Germany ），生物组织自动脱水机（LEICA ，IP1020 ，Germany ），生物组织包埋 机（LEICA ，EG1140，Germany ），垂直电泳仪，转移电泳仪（BIO-RAD 公司） 1.4.1 实验方法：将小鼠喂养至体重(30 ±2)g. ，按雌雄比例 1~3 ∶1 合笼，次日晨 7