弓形虫新疫苗候分子编码基因的筛选、质粒构建及保护性研究.pdf

摘要 目的：筛选新的弓形虫病疫苗候选分子，构建弓形虫真核表达质 粒pcDNA3／Z矿R1，并观察重组质粒所诱导的保护性免疫应答。 方法：1、用感染弓形虫的大鼠血清和正常大鼠血清免疫筛选弓 形虫速殖子cDNA文库，对阳性克隆测序并进行序列分析；2、通过各 种数据库和分析软件对新基因编码的蛋白质结构、功能及细胞表位进 行预测：3、采用PCR扩增出z矿R1目的基因，用肋胡I／Xho1分 别对扩增产物和真核表达质粒pcDNA3进行双酶切，将z矿R1定向克 I位点；对重组质粒进行PCR扩增、双酶切 隆到pcDNA3屁胡I／Xho 初步鉴定后作序列测定；4、大量制各并提纯重组质粒pcDNA3／Zg-R1， 肌肉注射法免疫小鼠；ELISA法检测特异性抗体水平；PCR检测肌肉 组织DNA中z矿R1基因；弓形虫RH株速殖子攻击感染免疫鼠，观察 其发病时间和存活时间。 结果：1、通过筛选弓形虫cDNA文库，共获得18个阳性克隆。 经序列测定发现插入片段的大小在0．45kb一3．2kb之间，查询所有基 Protein 因库并经ExPASy(ExpertAnalysiSSyste