抗软海绵酸单抗隆抗体的制备及初步应用.pdf

摘要 腹泻性贝毒在我国沿海最为常见，是危害最大的有毒藻类毒素之～。软海绵 酸(0A)是腹泻性贝毒晟主要成份。利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗软海绵 初步建立了快速检测海产品和海水中软海绵酸免疫学分析技术。 用碳化二亚胺法将半抗原OA分别和牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA) 偶联制备成完全抗原0A—BSA和0A—OVA。0A—BSA为免疫抗原，偶联比是27：1； 0A-0VA为检测抗原，其偶联比为12：l。 六次免疫后，小鼠产生抗OA的特异性抗体，血清效价均大于1：100000。加 强免疫后，挑选效价最高的小鼠进行细胞融合，通过间接ELISA方法进行筛选。 用B淋巴细胞杂交瘤技术．培养出4株抗软海绵酸的单克隆抗体杂交瘤细胞，细 胞株均能稳定分泌抗体。 采用BALB／c小鼠体内诱生的方法大量制备单克隆抗体。腹水抗体效价大于 l：30000，最高可达l：50000。用饱和硫酸铵沉淀法粗提腹水中单克隆抗体．经G 蛋白亲和柱层柝得到高纯度、高活性的抗软海绵酸的IgG类革克隆抗体。 利用方阵滴定法确定竞争性ELISA包被抗原最适工作稀释度为l：800，单克 隆抗体最佳稀释度为l：50000，辣根过氧化酶标电羊抗鼠196稀释倍数为i000。 建立的竞争性E