弓形虫gra6sag1基因克隆及其表达产物的应用研究.pdf

56 876 r’ 9 弓形虫GRA6和SAGI堪蚓克降表达艘]c产物的应用 摘 要 目的：从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中克隆GRA6基因片段， 构建重组质粒pGEX．GRA6，与本实验室已构建好的重组质粒 pGEX．SAGl分别导入大肠杆菌中表达，且对表达产物进行纯化，以 纯化的该两种重组蛋白作为诊断抗原，构建新型弓形虫基因工程诊断 试剂盒，用于检测弓形虫感染及鉴别急、慢性期弓形虫病。 方法：1．用CF．11纤维素柱快速提纯弓形虫速殖子，抽提弓形虫总 DNA；根据基因库已报告的基因序列，设计并合成扩增GRA6基因 的一对引物，采用聚合酶链反应(PCR)从昆山分离株和RU株总 和EcoRI双酶切出GRA6基因片段，以相同的酶切位点导入表达质 转化大肠杆菌BL21．Codon 达，超声破壁后，SDS．PAGE分析表达产物的表达形式，对上清液中