鸭瘟病毒UL17蛋白和UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位的分析.pdfVIP

中文摘要 验，对ULl7基因进行原核表达、多克隆抗体制各、转录表达时相分析及ULl7蛋白与UL25 蛋白、UL26．5蛋白的细胞共定位研究，结果如下： 1．DPV-ULl 7基因的生物信息学分析生物信息学方法分析DPV-ULl7基因，结果表 明ULl7基因编码蛋白分子量为75．94298kDa，由684个氨基酸组成，无信号肽位点及跨膜 区。同时该蛋白含19个磷酸化位点、4个糖基化位点和多个抗原表位，预测其主要定位在细 胞核和细胞质。 2．DPV-ULl7基因克隆表达、蛋白纯化和多克隆抗体制备根据DPVUL]7基因序列， 用PrimerPremier 5．0软件设计出一对特异性引物，并将扩增的ULl7全基因克隆入pMD20一T 性小鼠和雄性家兔，制备鼠抗重组蛋白高免血清和兔抗重组蛋白高免血清，最高效价分别为 1：4和1：32。 3．DPV ULl7基因转录和表达时相分析根据DPVULl7基因序列，在其内部设计了 一对FQ．PCR的引物用于转录时相分析。药物抑制实验结果显示，uLl7基因为晚期基因。 开始急剧下降。通过Westem 7基因为晚期基因。 个实验的结果说明ULl 4．DPV ULl7基因编码蛋白亚细胞定位采用间接荧光免疫法检测ULl7蛋白在DPV 感染的鸭胚成纤维细胞内的定位情况。结果显示，ULl7蛋白刚开始定位在细胞质，然后逐 渐进入细胞核，同时随着表达量增大荧光亮度也在增大。说明uLl7蛋白定位在细胞质及细 胞核。且无论在细胞核还是细胞质可见绿色荧光为颗粒状或点状。 5．DPV ULl7蛋白与UL25蛋白、L刀卫6．5蛋白亚细胞共定位研究采用双重间接荧光 细胞内是否共定位。结果显示，ULl7蛋白与UL25蛋白共定位于细胞核和细胞质；ULl7蛋 白与UL26．5蛋白也共定位于细胞核和细胞质。 关键词：鸭瘟病毒；ULl7基因；原核表达；多克隆抗体制备；转录表达时相：亚细胞定位； 共定位 万方数据 Abstract Co—localizationofULl7ProteinandUL25Protein．UL26．5Proteinfrom Duck VirusinInfectedCells Plague Wen Ting(PreventiveVeterinaryMedicine) Directed Anchunand byProf．Cheng Prof．WangMingshu LittlestudiesonDPVULl7 havebeen focusedonthe gene reported．Thisessay sequence and 10calizationofDPVULl7 characteristiCS．transcriptionexpressiondynamicanalysis．subcellular andULl7 ofULl7 andUL25 gene protein．Inaddition,Co—localizationprotein protein,UL26．5 bornduck virusCHVstrainininfectedcells．Theresultsareasfollows： protein plague 1．BioinformationofDPVULl7 DPVULl7 Was analysis gene．The gene anal