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中文摘要 Genistein对大鼠脑缺血中铜蓝蛋白 时相性变化的影响 摘 要 缺血性脑血管疾病是常见病、多发病，严重威胁人类健 康。缺血过程中神经元损伤的病理生理机制尚不完全清楚， 可能包括自由基生成、兴奋性谷氨酸过量释放和细胞内钙过 的血清a：一糖蛋白，是人体重要的亚铁氧化酶，属多铜氧化 酶家族。循环中CP主要由肝脏合成，在正常状态下，不能 通过血脑屏障入脑。新的研究发现，脑内的CP来源于自身 合成。中枢神经系统的CP来源于脑毛细血管床周边的神经 胶质细胞。进一步的研究显示，大鼠脑内的CP结构除少量 是分泌形式外，主要为磷酸肌醇锚定形式，结合在星形胶质 细胞膜上。生理状态下CP是催化Fe2+氧化为Fe3+必不可少 的氧化酶，后者是铁与转铁蛋白相结合的主要形式。CP和 转铁蛋白的这种作用被认为是机体重要的抗氧化机制。所以 CP对机体铁转运和铁平衡起着重要作用。CP在外周组织中 有急性时相蛋白和抗氧化应激的作用，可因感染、组织梗死、 创伤和手术等原因引起的炎症反应而增多。大量研究都指 出，脑缺血时铁在局部组织沉积。铁特别容易与氧发生反应， 产生大量活性氧簇(ROS)，进而造成组织损伤。CP的亚铁 氧化酶活性可将铁转移至转铁蛋白，从而降低组织中游离 Fe2+浓度。有报道称CP在脑局部缺血中有抗自由基作用。 植物性雌激素来源于植物，是一类天然存在于植物中的具有 中文摘要 双酚环结构的生物活性物质，可与雌激素受体(ER)结合 发挥雌激素样作用。主要有三大类：异黄酮类、木酚素类和 香豆雌酚。Genistein属异黄酮类植物性雌激素。目前已发 现两种类型的雌激素受体E＆和ER8均在脑组织中表达。L ephart等报道了异黄酮类植物雌激素分子可通过血脑屏障 进入大脑。Toung等经股静脉导管注入结合雌激素应急治疗 雄性大鼠局灶性脑缺血，与长时间雌激素治疗同等程度地降 低了其脑组织损伤。本研究旨在采用雄性大鼠局灶性永久性 脑缺血模型，利用HE染色、电镜、免疫组化、及流式细胞 等方法，观察脑缺血过程中cp的时程性变化；并经颈内动 脉注射Genistein，观察其对脑缺血性损伤时形态学改变及 CP表达的影响。所得结果如下： 1脑缺血过程中CP的时相性变化 采用拴线法永久性闭塞大鼠左侧大脑中动脉(middle cerebral artery 24h、48h、72h取材，用于光镜、电镜及免疫组化、流式细 胞研究。 1．1免疫组化法显示CP表达变化：CP阳性表达为微血管周 围的星型胶质细胞上的弥漫性棕黄色颗粒。各时间段(按照 假手术组，6h，12h，24h，48h，72h缺血组顺序排列，下 同)CP阳性细胞计数分别为167．10圭4．36，129．25士1．71， 114．50士6．60，86．75士4．22，157．00 4-4．37，189．32士2．16(个 ／10I-IP)；细胞阳性反应颗粒光密度分别为0．47士O．05，O．35 阳性细胞计数与细胞阳性反应颗粒光密度的乘积(所选视野 内免疫反应阳性颗粒的多少，反映细胞群体的总CP量)分 中文摘要 4-3．18， 4-2．73，23．66 别为78．644-3．73，45．01士1．47，35．30 74．144-2．15．101．044-8．43(个．％)。与假手术组相比，CP 在缺血6h-24h时间段明显减少，而后，在48h、72h缺血 组逐渐回升。 1．2流式细胞仪检测CP表达变化：假手术组，6h，12h，24h， 4-0．1 l， 48h，72h缺血组CP阳性细胞荧光强度分别为：6．35 5．26士O．27，4．314-0．35，2．744-0．16，6．47士0．